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- 【导读】 背景介绍 我们通常所讲的硅胶柱色谱是指硅胶吸附色谱,其分离原理在于依据待分离化合物与硅胶表面的硅醇基的吸附力不同,从而实现化合物的分离。而硅胶柱除了依据吸附原理分离化合物外,
背景介绍
我们通常所讲的硅胶柱色谱是指硅胶吸附色谱,其分离原理在于依据待分离化合物与硅胶表面的硅醇基的吸附力不同,从而实现化合物的分离。而硅胶柱除了依据吸附原理分离化合物外,还可以依据分配原理实现化合物的分离,即硅胶分配色谱,本人依据实践经验对硅胶分配色谱相关事宜简述如下,希望对各位朋友有所帮助。
什么是硅胶分配色谱?
谈到分配,就要存在两种互不相溶的溶剂系统(这有别于硅胶吸附色谱,吸附色谱所用溶剂为单一系统,可能由两相组成,但这两相肯定互溶为一个系统),极性大的溶剂系统吸附在硅胶(支持剂)上,分离过程中不移动,称为为固定相;极性小的溶剂系统作为洗脱剂,分离过程中从柱子上慢慢移动下来,称为流动相。在整个分离过程中,待分离化合物不断地在固定相和流动相之间反复分配,从而实现分离。注意:在三相系统中,我们要分清固定相与流动相,以氯仿-甲醇-水为例,流动相为水饱和的氯仿-甲醇,固定相为氯仿饱和的甲醇-水。
硅胶分配色谱的应用范围?
原则上讲各类化合物均可利用硅胶分配色谱实现分离,但实际工作中硅胶分配色谱用的较少,主要用于一些水溶性较大的化合物的分离,如皂苷、糖类、酚类化合物等。
硅胶分配色谱常用展开系统有哪些?
氯仿-甲醇-水;乙酸乙酯-乙醇-水;水饱和的正丁醇;正丁醇-乙酸乙酯-水;氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水。
硅胶分配色谱注意事项有哪些?
⑴固定相与流动相必须预先相互饱和,否则,当流动相流过固定相时,会把固定相从支持剂(硅胶)上夺下来,慢慢的只剩下支持剂了,此时,已不是分配色谱了,必然导致分离的失败。
⑵虽然硅胶分配色谱洗脱时使用两种或三种溶剂,但装柱时*好使用一种溶剂(为了装的均匀),所以我们应先用一种溶剂装柱,然后再将其置换成起始溶剂。
⑶在洗脱过程中,要尽量使待分离化合物在两相溶剂间达到平衡,所以流动相的流速要慢一些。
⑷一般来讲,生物碱或酸性物质常用缓冲溶液作为固定相。
硅胶分配色谱之个人应用:
硅胶分配色谱广泛用于各种皂苷的分离纯化中,如人参皂苷在用氯仿-甲醇(吸附色谱)展开时为一条直线,分不开;但采用氯仿-甲醇-水(分配色谱)展开时,效果不错, 展开剂:氯仿-甲醇-水;显色剂:浓硫酸-香草醛
6、后记
理论上讲,部分人参皂苷可以通过硅胶分配色谱拿到纯品,但由于种种原因,后续进一步纯化工作搁置,敬请谅解。
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- 2006-07-05 13:15:46
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