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一个标准的细胞培养实验室应该是这样的……

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【导读】导语你所在的细胞培养实验室是功能完善的细胞培养实验室吗,不但要布局合理,还要操作安全、方便,并能避免污染,既能满足工作需要,又能保证检验结果不受干扰。防火、防潮、防腐性能样样兼备,...

导语

你所在的细胞培养实验室是功能完善的细胞培养实验室吗,不但要布局合理,还要操作安全、方便,并能避免污染,既能满足工作需要,又能保证检验结果不受干扰。防火、防潮、防腐性能样样兼备,通风、净化、消毒、灭菌功能更是必不可少。遵循安全、高效、舒适以及“以人为本”的原则,才能建成正规化、标准化的细胞培养实验室,达到最佳的使用效率。

一、细胞培养实验室设计与布局

组织细胞培养技术研究的对象不一般,它是具有完整生命力的生物单位,因此与其他一般实验工作不同,要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。

细胞培养实验室应能进行六方面的工作:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。

各部门最好分别设置于相连的各个房间,特别是无菌操作室最好能单独设置;如都安置在一大实验室内,无菌操作区与清洗、消毒灭菌区应分别位于两端,而制备、储藏和孵育区位于此两区之间。

1.无菌操作区

(1)无菌操作室:只限于细胞培养及其他无菌操作的区域,最好能与外界隔离,不能穿行或受其他干扰。

理想的无菌操作室应划为三部分:

•更衣室——供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

•缓冲间——位于更衣间与操作间之间,目的是为了保证操作间的无菌环境,同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。

•无菌操作间—―专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当,且其顶部不宜过高(不超过2.5m)以保证紫外线的有效灭菌效果;墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁,台面要光滑压塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。

(2)超净工作台/生物安全柜:操作简单,安装方便,占用空间小且净化效果很好。

两者的基本原理都有通过风机的作用将气体经过高效过滤器后形成无尘无菌的高洁净度目标环境的过程,因此仪器所配置的风机和高效过滤器的性能直接决定了目标环境洁净度的等级。

超净工作台与生物安全柜的区别:

2.孵育区

本区对无菌的要求虽不比无菌区严格,但仍需清洁无尘,因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。一般实验室多采用孵箱进行孵育工作。

3.制备区

在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。在有天平、PH计、磁力搅拌器等设备下完成制备以后,应在无菌操作台进行过滤除菌。液体制备看似简单,但也马虎不得,它直接关系组织细胞培养的成败,如果不严格无菌操作也许就会上演年度大戏——蓝瘦香菇。

4.储藏区

对储藏区的要求是取放方便,主要有冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等,此环境也需要清洁无尘。

5.清洗和消毒灭菌区

清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开,主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。

二、常用的基本设备

组织细胞培养研究生产的必须设备,缺少则无法进行工作。

1.仪器

(1)显微镜

为了掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。若实验室经费允许,能配置带有照相系统的高质量相差显微镜,便可随时摄影、记录细胞的情况,对科研工作的开展大有帮助,若有条件,还可添置解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统装置。

(2)培养箱

体外培养的细胞和体内细胞一样,都需要在恒定而适宜的温度下才能生存。大多数哺乳动物细胞的适宜培养温度是35至37℃,细胞在温度升高2℃时,持续数小时即不能耐受,40℃以上将很快死亡,因此需要有能控制温度的培养箱。如恒温培养箱及二氧化碳培养箱,均有较高的灵敏度。此外,动物细胞多数需要在微碱性环境存活和生长,pH为7.2~7.4,以不超出6.8~7.6为宜。CO2既是细胞所需成分,也是细胞代谢产物,它与大多数培养基中的碳酸氢钠形成缓冲体系,维持生理pH。二氧化碳培养箱能够精确控制二氧化碳浓度,普通的恒温培养箱却无法实现。现在开放或半开放的细胞培养实验室多选用二氧化碳培养箱。广受科研工作者认可的是气套式、配置红外传感器的二氧化碳培养箱,这些培养箱比一般普通的培养箱灵敏度高,温度及二氧化碳浓度也较稳定。

(3)烘箱

用于细胞培养的有些器械、器皿要烘干才能使用。玻璃器皿需干热消毒,因此,细胞培养实验室均配置有电热干燥箱/烘箱。

(4)水纯化装置

细胞培养对水的质量要求很高,所用的水必须先纯化处理。水纯化时可采用离子交换纯水装置或蒸馏器。

(5)冰箱

细胞培养室必须配备有普通冰箱或冷藏箱,冰箱最好有一台低温冰箱(-20℃)。前者用于储存培养液、生理盐水等培养用的物品及短期存放组织标本。-20℃超低温冰箱则可用于储存那些需要冷冻保持生物活性及较长时期存放的制剂。

(6)细胞冷冻储存器

细胞培养工作常需要储存细胞,液氮温度很低,达-196℃,在此温度下,细胞的物质代谢和生命活动几乎完全停止。因此常用液氮容器储存细胞。使用时要防止冻伤。由于液氮不断挥发,应注意观察存留液氮情况,及时定期补充液氮,避免挥发过多而致细胞受损。

(7)离心机

用于制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞。

(8)消毒器

直接或间接与细胞接触的的物品均需消毒灭菌处理。如另设有统一的消毒供应室,有些常用的,较大的物品可由该室消毒灭菌后提供。即使如此,有时临时需加用的物品或易破碎的器皿仍需细胞培养实验室自行消毒,因此应配置有本实验室的消毒器,常见选用高压蒸气灭菌器。

(9)天平和滤器

配置培养液、消化用胰酶溶液、缓冲液等培养细胞所需试剂需要用天平进行称量,配置好后仍需用滤器对其过滤除菌,方可用于细胞培养。

2.培养用器皿

要求:透明度好、无毒

与培养操作有关器皿:吸管、移液器

除此之外,收集细胞使用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的试管,以及用于细胞计数的血球计数板或自动细胞计数仪器,都是细胞培养实验室需配置的器材。有时还需要存放小件培养物品,为方便进行高温消毒许多实验室会选择用铝饭盒用于盛装物品。

三、特殊设备

为了更高效、精确、深入地开展细胞科学地研究,有条件(土豪)的实验室可添置一些特殊的、先进的、精密的设备仪器,如多功能酶联免疫分析仪、荧光显微镜、流式细胞仪、细胞扩增系统(生物反应器)等。

生物反应器

结语

Esco对标准细胞培养实验室建设的分享,让你面对细胞培养实验室建设或升级改造任性说Soeasy!


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2018-07-29 09:50:25
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