在线净化与固相萃取的比较-简单/方便

http://www.thermo.com.cn/Resources/201104/29123547853.pdf

在线净化LC-MS/MS
系统对动物组织中克伦特罗残留的检测分析
赵孔祥1王海鉴2
1.天津出入境检验检疫局食检ZX；2.赛默飞世尔科技（ZG）有限公司
克伦特罗俗称瘦肉精，常被用作饲料添加剂以提高家
畜的瘦肉含量，但由于其严重的毒副作用，欧盟于1988
年1月1日起禁止盐酸克伦特罗物质当饲料添加剂使用。
1991年被FDA禁止。1997年，中华人民共和国农业部下
文严禁β-肾上腺素类激素在饲料和畜牧生产中使用，盐酸
克伦特罗列为diyi位。2009年7月为应对日、韩从我国食
品中检出盐酸克伦特罗事件，质检系统确定了了更严格的
出口判定标准（0.05μg/kg），食品检测已经进入超痕量时代。
在此背景下，我们需要更有效的前处理手段以便我们
得到更加浓缩更加纯净的样品来提高我们的信号降低我
们的噪音。基于色谱原理的创新样品制备方法——Turbo
Flow技术为我们提供了新的思路。这种在线自动过程处理
技术结合了扩散、化学和体积排除的原理，在捕获感兴趣
分析物的同时，快速消除基质干扰。本实验旨在建立一个
前处理简单，选择性灵敏度高的克伦特罗的TurboFlow实
用在线净化方法，并确定该方法的检出限。
1实验部分
1.1样品制备
取5g动物组织样品与10mL乙腈，10%乙酸铵（1:3）
混合溶液混匀匀浆10分钟，5000r/min离心十分钟取
1mL上清液经过0.22μm注射过膜，上机。
1.2TurboFlow条件
系统：
ThermoScientificAria
TLX-1controlledbyAria.software
在线净化柱：TurboFlowCycloneMCX0.5×50mm
进样体积：50μL
上样溶剂：0.1%的甲酸水溶剂
上样流速：2mL/min
洗脱溶剂：1%的氨水甲醇溶液
洗脱体积：50μL
1.3HPLC方法条件
色谱柱：HypersilGOLDaQ3μm100X2.1mm
流路A：0.1%的甲酸水溶液
流路B：甲醇
时间（min）A%B%流速mL/min
090100.4
190100.4
2.3380200.4
2.8360400.4
610900.4
6.510900.4
890100.4
1.4质谱条件
1.4.1调谐参数
系统TSQUltraAM
离子源极性：正离子模式
喷雾电压：4500V
鞘气压（N2）：50arb
辅助气压（N2）：16arb
毛细管柱温度：350°C
碰撞气体（Ar）：1.5mTorr
Skimmeroffset10V
Q1/Q3峰分辨度：0.7u（单位质量）
1.4.2SRM反应参数
被分析组分
母离子
（m/z）
子离子
（m/z）
碰撞能量
（V）
管透镜电压
（V）
克伦特罗-D9286169.128104
克伦特罗277132.22994
168.1*2894
203.61594
*为定量离子
2结果与讨论
食物样品本身基质比较复杂，在进行检测之前往往
需要一个较长的样品预处理过程。比如贾晓飞等使用酶
解，高氯酸沉淀蛋白，邵兵等应用HLB和MCX两次SPE
对食品中β2-受体激动剂进行残留检测都取得了很好的效
果，这些方法的目的也都是为了获得更加浓缩和纯净的样
品。应用Turbo-Flow在线净化技术使得这些工作变得更加
图1TurboFlow在线净化与HPLC联用方法参数
热点聚焦Hotspot
简洁方便，减少了中间步骤和偶然误差，使得加标回收的
重复性很稳定，0.05μg/kg浓度下六平行RSD为5.36%；
同时由于样品更加纯净浓缩，干扰较少，此方法在添加量
为0.02μg/kg浓度下峰型良好（如图2所示）。根据欧盟
法规计算此方法检出限（LOD）为0.002μg/kg，定量限为
0.006μg/kg已经能轻松应对实际需要。同时如果有实际
需要，可以采用更长的净化柱（100mm规格）或者采用串
联净化柱的方法进一步增加样品浓缩倍数，来提高检出限。
由于采用了在线净化系统，进入分析色谱柱的样品也更
图20.02μg/kg浓度色谱图
图320pg/g添加回收比较图。左图为MCX固相萃取净化，右图为在线净化结果
为纯净，一定程度上降低了噪音和杂峰的产生。如图3所示，
采用TurboFlow技术一定程度上起到了稳定基线的作用。
运用Transcend在线净化系统的操作软件AriaOS的
变量设置功能，可以方便设置批处理程序尝试不同的洗
脱溶液。在比较不同浓度的氨水甲醇溶液后，结果表明
1%的氨水甲醇溶液作为洗脱溶液的效果Zyou。使用外
标法计算其与不经过净化柱的结果得到其回收率为
79%~84%。而且此浓度的氨水甲醇溶液以0.2mL/min的
速度与0.4mL/min的分析柱溶液混合不会对GX液相色谱
产生不良影响，在使用此方法千针后，10个平行的保留
时间RSD仍然只有0.1%。
分别配置5pg/mL，10pg/mL，20pg/mL，50pg/mL，
100pg/mL，200pg/mL，500pg/mL，1ng/mL，2ng/mL
的克伦特罗标准溶液，其中都混有100pg/mL内标，内标
法定量得到标准曲线有很好的线性（曲线见图3），相关系
数R2为0.9995
向5g动物组织中分别添加100pg、250pg、500pg
克伦特罗标准，内标法定量，计算其回收率结果表明，经
过在线净化和内标法校正后样品回收率非常稳定。简单的
前处理步骤带来Z少的偶然误差。
表1克伦特罗不同添加水平回收率
添加水平平均回收率%RSD%*
20pg/g94.25.58
50pg/g96.55.36
100pg/g94.42.49
*为六平行水平下RSD值
3结论
采用TurboFlow在线净化技术可以非常方便的按要求
得到更加浓缩，干扰更少的样品，提高了信噪比，降低了
检出限。
TurboFlow图4克伦特罗标准曲线在线净化技术简化了前处理步骤，减少了
热点聚焦Hotspot
偶然误差获得了令人满意的重现性。
使用AriaOS操作系统，我们可以很方便的设置批处
理变量，尝试不同种类或者比例的上样或者洗脱溶剂。
4参考文献
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