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- 【导读】用上海沛欧定氮仪? 用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时,其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水,而氮...
用上海沛欧定氮仪?
用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时,其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水,而氮则转变成氨,并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是,这个反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行。消化完成后,在凯氏定氮仪中加入浓碱,可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,借助水蒸汽蒸馏法,将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨与溶液中氢离子结合,使溶液中的氢离子浓度降低,指示剂颜色改变,然后用标准无机盐酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。蛋白质的含氮量为16%,即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质,用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。
1实验材料1.1器材 上海沛欧SKD-100定氮仪 、消化炉SKD-08S2 1.2试剂2实验步骤
实验材料
器材
上海沛欧凯氏定氮仪1套(SKD-08S2消化炉可以任意选择消化孔数,而不影响热量散失);
300ml凯氏烧瓶4个;
移液管;锥形瓶;
试管;
小玻璃珠
试剂
98%浓硫酸分析纯;
35%氢氧化钠溶液;
2%硼酸溶液;
标准盐酸溶液(0.01mol/L)。
粉末硫酸钾—硫酸铜混合物:K2SO4与CuSO4·5H2O以3:1配比研磨混合。
混合指示剂(田氏指示剂):由50ml0.1%甲烯蓝乙醇溶液与200ml0.1%甲基红乙醇溶液混合配成,贮于棕色瓶中备用。
样品溶液:配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。
实验步骤
安装凯氏定氮仪。
消化:取4个300ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠,在1号及2号瓶中各加样品1ml,催化剂(K2SO4-CuSO4·5H2O)200mg,浓硫酸5ml。注意加样品时应直接送入瓶底,而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸,作为对照。在通风橱内进行消化。在消化开始时应控制火力,不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力,冷却至室温。(上海沛欧SKD-08S2消化炉可编程设定消化炉消化样品的升温曲线)
蒸馏:
蒸馏器的洗涤:用水洗涤干净微量凯氏定氮仪,在蒸汽发生器中加入用几滴硫酸酸化的蒸馏水和几滴甲基红指示剂,用这样的水蒸气洗涤凯氏定氮仪。约15分钟后,在冷凝器下端倾斜放好装有硼酸-指示剂的锥形瓶,继续蒸汽洗涤2分钟,观察锥形瓶内的溶液是否变色,如不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。移走锥形瓶,停止加热,打开夹子。(沛欧skd-100可以设定清洗程序)
蒸馏:设定取30%的氢氧化钠溶液10ml,向玻璃杯中加入蒸馏水约5ml稀释液,设定蒸馏时间5分钟,开始蒸馏。氨气进入锥形瓶,瓶中的酸溶液由紫色变成绿色。再继续下一个蒸馏操作。待样品和对照均蒸馏完毕后,同时进行滴定。
滴定:用0.01mol/L的标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量,硼酸指示剂溶液由绿色变淡紫色为滴定终点。
结果计算:
其中:
A为滴定样品用去的盐酸溶液平均ml数;
B为滴定对照液用去的盐酸溶液平均ml数;
C为所取样品溶液的ml数。
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- 2004-08-02 09:17:05
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