- 免费领取!2024年4月研讨会培训证书
- 精彩回顾丨2024年《江苏省实验室质量控制与检测技术创新研讨会》圆满举办!
- 应用分享 | 新型2910nm光纤激光器单点阵烧蚀治疗疤痕表面修复
- 中华质 谱新章 | 沃特世高端国产质谱系列首发仪式,诚邀您参加!
- 极速揭秘 | 10分钟内完成UV-Vis热解链实验
- 限时福利来袭!瑞沃德用户服务中心2024年仪器巡检活动即将开启
- DSC-200即将上市 | 体验双通道单细胞悬液制备,尽在瑞沃德
- 行业盛典回顾 | 第13届国际天然气转化会议揭秘行业新动向
- 卓立·光机 | 六轴并联机器人在VR眼镜测试中的应用
- 半导体行业解决方案之LC和SEC分离技术的应用案例
- 沃特世推出全新GTxResolve Premier SEC色谱柱,加速基因治疗药物开发
- 一位“科研工具人”的自述:当科研遇上瑞沃德
- 超净工作台的两种分类该如何选择呢
- 来源:内容来源于网络 浏览量:1315次
- 【导读】 1.进口PCR仪cDNA产量的很低 可能的原因: *RNA模板质量低 *对mRNA浓度估计过高 *反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足 *同位素磷32过期 ...
1.进口PCR仪cDNA产量的很低 可能的原因: *RNA模板质量低 *对mRNA浓度估计过高 *反应体系中存在反转录酶YZ剂或反转录酶量不足 *同位素磷32过期 *反应体积过大,不应超过50μl 2.进口PCR仪扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 *Z常见的原因在于您的反应体系是进口PCR仪的反应体系而不是RT-进口PCR仪的反应体系 *与反应起始时RNA的总量及纯度有关 *建议在试验中加入对照RNA *diyi链的反应产物在进行进口PCR仪扩增时,在总的反应体系中的含量不要超过1/10 *建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物(GSP)用于diyi链合成。由于RNA模板存在二级结构,如环状结果,有可能导致GSP无法与模板退火;或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。 *目的mRNA中含有强的转录中止位点,可以SY以下方法解决: a.将diyi链的反应温度提高至50℃。 b.使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行diyi链反应。 3.产生非特异性条带 *用RT阴性对照检测是否被基因组DNA污染。如果RT阴性对照的进口PCR仪结果也显示同样条带,则需要用DNaseI重新处理样品。 *在进口PCR仪反应中,非特异的起始扩增将导致产生非特异性结果。在低于引物Tm2至5℃的温度下进行退火,降低镁离子或是目的DNA的量将减少非特异性结果的产生。 *由于mRNA剪切方式的不同,根据选择引物的不同将导致产生不同的RT-进口PCR仪结果。 4.产生弥散(smear)条带 *在进口PCR仪反应体系中diyi链产物的含量过高 *减少引物的用量 *优化进口PCR仪反应条件/减少进口PCR仪的循环次数 *在用DNase处理被DNA污染的RNA样品时,其产生的寡核苷酸片段会产生非特异性扩增,一般会显示为弥散背景。 5.进口PCR仪产生大分子量的弥散条带 *大多数情况下是由于退火温度过低而导致的非特异性的起始及延伸产生的 *对于长片段的进口PCR仪,建议将反应体系中cDNA的浓度稀释至1:10(或1:100-1:200) 6.在无反转录酶的情况下,对照RNA获得扩增结果 *通常是由于对照RNA中含有痕量DNA而导致的。由于进行体外转录时不可能将所有的DNA模板消除。建议可将diyi链cDNA稀释1:10、1:100、1:1000倍以消除DNA污染所造成的影响。 *有可能是引物二聚体的条带 7.进口PCR仪扩增产物滞留在加样孔中 *有可能是由于模板量过高而导致进口PCR仪结果产生了高分子量的DNA胶状物。建议将diyi链结果至少稀释100倍再进行二次扩增。 *另外,在二次进口PCR仪时使用的退火温度如果比引物的Tm值低5℃,可以将退火温度适当或进行热启动以提高特异性。 8.SSⅢ与SSⅡ有何不同? *具有更高的热稳定性(达50℃) *具有更长的半衰期(达220分钟) *对进口PCR仪无YZ *干冰运输 *Tdt活性更低 9.为什么有人更喜欢用SSⅢ而不是ThermoScript? ThermoScript如果保存不当会引起活性很快降低,SSⅢ则更稳定。 10.为什么使用基因特异性引物(GSP)? GSP在扩增低丰度的转录本时是Z好的。OligodT引物建议用于高质量RNA及全长转录本的逆转录;随机引物用于mRNA片段的逆转录。 11.进口PCR仪什么情况下需要使用RNaseH? 在diyi轮进口PCR仪中RNA/DNA杂合体不能正常变性时
仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-08-11 09:23:07
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
BW单一气体检测仪常见问题常见问题及解决方法2006-01-18 08:53:32
BW单一气体检测仪常见问题常见问题及解决方法 1、开机后立即关机造成这个问题可能有多种原因,但通常情况下这是
-
PCR常见问题2-混匀仪技术文章2007-04-30 10:17:37
PCR常见问题2-混匀仪技术文章PCR常见问题2-混匀仪技术文章 克隆 PC
-
PCR常见问题1-混匀仪技术文章2008-08-26 08:29:49
PCR常见问题1-混匀仪技术文章PCR常见问题1-混匀仪技术文章PCR产物的电泳检测时间
-
PCR常见问题解决方法2004-11-22 09:23:05
1)出现假阳性的原因是什么?出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。①引物设计
-
华雅干细胞为你解答细胞培养常见问题2004-08-13 09:23:10
1、可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和
-
PCR常见问题1-混匀仪技术文章2008-08-27 08:27:03
卧式螺带混合机结构特点:由驱动机构、“u”型简体、螺带搅拌机构、机盖、支架及出料机构
-
石墨炉原子吸收分光光度计常见问题解答2004-08-21 09:23:03
石墨炉原子吸收分光光度计常见问题解答 原子吸收常见问题处理 1、为啥原子吸收仪器的灵敏度会突然下降了
-
Western Blot常见问题及注意事项2004-08-30 09:23:16
WB常见问题常见问题解决对策及注意事项两快玻璃板之间灌胶,胶总是不平玻璃没有洗干净,应该要洗得非常干净过硫酸
-
Rexroth齿轮泵进口详细说明2004-09-02 09:23:06
Rexroth齿轮泵又称力士乐液压泵,是很多液压系统上用的进口工业备品备件!Rexroth齿轮泵目前提供详细
-
卡氏水分测定仪常见问题解答2004-07-06 08:51:50
卡氏水分测定仪常见问题解答 1、阳极电解液颜色不呈亮黄色,而是介于棕色和暗黄色之间? 颜色过深,
进口PCR仪的常见问题详细解答
-
您可能感兴趣
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi