多年细胞培养者的培养经验

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多年细胞培养者的培养经验点击次数：111 发布时间：2017/4/11

多年细胞培养者的培养经验

1. 胎鼠/小鼠的胎龄、周龄Z重要，一般胎鼠优于新生鼠，早龄胎鼠优于晚龄胎鼠。一般用E12.5天的端脑，此时神经元发生才刚刚开始，皮质层次大概在10几个细胞左右。取得细胞活力高、生长快，不管高低密度都没问题。如果是E14.5天及之后的，皮质中已有大量postmiotic的分化细胞，Z好是低密度接种，否则这些细胞会聚团成球状，干扰真正的前体/神干成球。

2. B27的成分远远多于N2（具体成分见1993年Neuroscience Method中的原文），对细胞的保护性更好（尤其是人的神干），但比N2贵，条件允许的话，建议一直用B27现在invitrogen有几种B27，配方略有不同。

3. 鼠的神经球传代基本不用酶，纯机械吹打就可。所见的条索状是由于部分细胞破损，释放的DNA成了球粘附的基质（这好像是胰酶消化特有的现象，其他方法不见）。对于人的神经球，要脆弱一些，需多多炼习手法。经济条件好的话，可试试Sigma的Acctuase，一个相不错的消化酶，有可能在将来取代胰酶，用于这些娇气细胞的消化。

4. 培养基换得勤的话，贴壁并不就意味着分化，现在一个趋势大概就是以贴壁取代悬浮吧。减少贴壁的一个方法是低密度接种，如果以accutase传代的话，基本不会有贴壁问题。

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2004-07-12 15:05:27

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