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- 【导读】超滤离心管的保养与使用方法一、超滤离心管的作用:1、新购买的超滤离心管可以直接使用,不需要做其他处理。2、超滤离心管不能高温高压灭菌。3、超滤离心管用于浓缩。4、脱盐。5、换Buf...
超滤离心管的保养与使用方法
一、超滤离心管的作用:
1、新购买的超滤离心管可以直接使用,不需要做其他处理。
2、超滤离心管不能高温高压灭菌。
3、超滤离心管用于浓缩。
4、脱盐。
5、换Buffer
6、具有部分纯化功能的效果。
二、浓缩蛋白时超滤离心管的处理:
超滤离心管可以重复使用,用0.1M的NaOH浸泡1-2h,用水清洗,再在离心机上用相关溶液(灭菌水或PBS)清洗3次,即可用于浓缩新的蛋白;(注:清洗过程不可马虎)。
三、经常使用的超滤离心管的放置:
使用频率高的超滤离心管,应放置在用0.1M的NaOH溶液浸泡1-2h,用水清洗,用灭菌水浸泡,务必保持滤膜润湿,不能长菌;(注:常检查,多清洗。)
四、不常用的超滤离心管的处理:
使用率不高的超滤离心管,应放置在用0.1M的NaOH溶液浸泡1-2h,用水清洗,用20%的乙醇浸泡保存,务必保持滤膜润湿,不能长菌;(注:常检查)。
五、超滤离心管使用的离心转速:
离心机转速一般采用4000rpm(一般建议为3000g,Zda不能超过4000g)离心5-8分钟,即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升;速度过高,目的蛋白会离下,导致目的蛋白丢失;速度过低,耗时,工效低;
六、使用吸头伸入超滤离心管时应注意:
加入Buffer或者蛋白液到超滤离心管里面,可以用蓝吸头(1000ul),但从超滤管底吸取浓缩好的目的蛋白时,必须用黄吸头(200ul);用枪头伸入超滤管中时,必须防止碰到滤膜,以免戳破滤膜;
七、减少使用超滤离心管对蛋白的吸附损失:
超滤离心管的滤膜会吸附蛋白,能导致目的蛋白减少,Zgao可达30%左右;为减少蛋白损失,在吸尽目的蛋白液后,再用蛋白Buffer吹洗超滤管的管底,可以将滤膜吸附的蛋白洗下大部分而减少目的蛋白的损失;一般无论如何离心,底部会保留有200μl左右的蛋白液;
八、如何界定超滤离心管是否失效:
超滤离心管在正常使用下,滤膜没有被戳破时,浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低(包括目的蛋白),而diyi次的滤下液中含有目的蛋白,则说明滤膜失效,需要换新的超滤管。
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