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- 【导读】 酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:96T0.6µg/L-16µg/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中25羟基维生素D3(2...
酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T
0.6µg/L-16µg/L
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中25羟基维生素D3(25(OH)D3)含
量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人25羟基维生素D3(25(OH)D3)水平。用纯
化的人25羟基维生素D3(25(OH)D3)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微
孔中依次加入25羟基维生素D3(25(OH)D3),再与HRP标记的25羟基维生素D3
(25(OH)D3)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显
色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅
和样品中的25羟基维生素D3(25(OH)D3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光
度(OD值),通过标准曲线计算样品中人25羟基维生素D3(25(OH)D3)浓度。
试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(32µg/L)0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
16µg/L5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
8µg/L4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液
4µg/L3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液
2µg/L2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液
1µg/L1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,
然后再加待测样品10µl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结:
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间Z好
控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,Z好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值
大于标准品孔diyi孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计
算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月- 2004-07-13 09:31:27
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