- 【展会回顾】明美祝贺中国细胞生物学会2024全国学术大会取得圆满成功
- 报名倒计时7天|南京市实验室质量控制与检测技术创新研讨会,免费参会 !
- 江苏农药协会和企业代表来康宁调研
- 勇攀高峰 砥砺前行丨高砂电气销售技术部高级经理——曹广伟接受分析测试百科网专访
- 背靠核心光电技术,滨松助力眼科五大应用
- 与春日有个约“惠” | 卓立商城“晒单集赞”赢好礼
- 更新、重启、向上,华晨禾一盛大开业,携手共筑智造先锋!
- 低温等离子洁净器:KTV空气治理的理想选择
- 高博会 | 元客视界携FZMotion教育解决方案精彩亮相
- 鑫图Aries 16 vs. EMCCD | 用于TIRF单分子荧光检测的灵敏度比较
- 来盘活“政产学研医”,如何?
- 超级干货~FFPE试剂国内外横评
- 小体积 大能量丨QCL2 500 低噪音激光驱动器 引领激光技术新风尚
- 来源:内容来源于网络 浏览量:2603次
- 【导读】Bradford法测蛋白浓度是利用蛋白质-染料结合的原理,定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。Bradford法测蛋白浓度原理考马斯亮蓝(CBB)测定蛋白质含量属于染料结合法...
Bradford法测蛋白浓度是利用蛋白质-染料结合的原理,定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。
Bradford法测蛋白浓度原理
考马斯亮蓝(CBB)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝在游离状态下呈红色,Zda光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质色素结合物在595nm波长下有Zda光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1000μg/ml,bradford法测蛋白浓度是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
Bradford法测蛋白浓度试验过程
1、试剂:
(1)考马斯亮蓝试剂:
考马斯亮蓝G250100mg溶于50ml95%乙醇,加入100ml85%H3PO4,用蒸馏水稀释至1000ml,滤纸过滤。Z终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。
(2)标准蛋白质溶液:
纯的牛血清血蛋白,根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
2.器材:(1)可见光分光光度计(2)旋涡混合器
3、标准曲线的制作
试管编号0123456
100ug/ml标准蛋白(ml)0.00.10.20.30.40.50.6
0.15mol/LNaCl(ml)10.90.80.70.60.5?0.4
考马斯亮蓝试剂(ml)5555555
摇匀,1h内以0号管为空白对照,在595nm处比色
A595nm
以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标(六个点为10ug、20ug、30ug、40ug、50ug、60ug),在坐标轴上绘制标准曲线。
4、样品中蛋白质含量的测定
另取两支干净的试管(做一重复),加入合适浓度的待测样品,使其测定值在标准曲线的范围内,测定方法同上,由样品液的吸光度查标准曲线即可求出含量。
注意事项:
1、如果要求严格,Z好在试剂加入后的5~20min内测定光吸收,因为这段时间内颜色是Z稳定的。
2、若选择在旋涡混合器上混合,注意不要太剧烈,以免产生大量气泡而难于消除。
一、实验目的
用bradford法测蛋白浓度,测定未知蛋白质浓度样品的吸光度,根据标准曲线得到蛋白质的浓度。配制一组浓度分别为0.10mg/ml,0.08mg/ml,0.06mg/ml,0.04mg/ml,0.02mg/ml,0mg/ml的牛血清蛋白(BSA)溶液,测定这组溶液的吸光度,得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。测定未知蛋白质浓度样品的吸光度,根据标准曲线得到蛋白质的浓度。
二、bradford法测蛋白浓度实验过程
1.准备所需的药品和仪器。
2.计算所需配制的溶液的量。
先配制1mg/ml的牛血清蛋白(BSA)母液,再往母液中加入磷酸缓冲溶液(PBS)配制一组浓度分别为1.0mg/ml,0.8mg/ml,0.6mg/ml,0.4mg/ml,0.2mg/ml的BSA溶液,再将这组溶液稀释10倍,得到一组浓度分别为0.10mg/ml,0.08mg/ml,0.06mg/ml,0.04mg/ml,0.02mg/ml的BSA溶液。计算diyi步稀释各组需要的BSA溶液及PBS溶液的体积。
BSA体积(ul)10080604020
PBS体积(ul)900920940960980
BSA浓度(mg/ml)1.00.80.60.40.2
3.具体操作过程。
用天平称量1.00g牛血清蛋白(BSA),溶于去离子水中,配成100ml的溶液,溶液的浓度为10mg/ml。用移液枪分别取100ul,80ul,60ul,40ul,20ul的BSA溶液,置于1.5ml的EP管中,再分别加入900ul,920ul,940ul,960ul,980ul的磷酸缓冲溶液(PBS)配成1ml的溶液,震荡使溶液混合均匀。得到一组浓度分别为1.0mg/ml,0.8mg/ml,0.6mg/ml,0.4mg/ml,0.2mg/ml的BSA溶液。
移液枪分别移取100ul刚配好的一组BSA溶液,置于1.5ml的EP管中,各加入900ul的PBS溶液,震荡使溶液混合均匀。得到一组浓度分别为0.10?mg/ml,0.08mg/ml,0.06mg/ml,0.04mg/ml,0.02mg/ml的BSA溶液。另外量取1ml的PBS溶液(BSA溶液浓度为0?mg/ml)作对照试验。
用移液枪分别移取50ul配好的一组BSA溶液,滴加到孔板中,再分别加入200ul的考马斯亮蓝(CBB)。静置10min后,用酶标仪测得这组BSA溶液的吸光度。
bradford法测蛋白浓度实验结果
通过用Bradford法测蛋白浓度,得到的吸光度对BSA浓度的关系曲线为y=3.09x+0.6807,R2=0.9541。可以看出吸光度浓度的关系曲线中R2值较小,即测得的吸光度与浓度的线性不是很好。究其原因可能有以下两点:一是移液枪的操作不是很熟练,二是移液枪在移液过程中存在着气泡,使移的液体体积不准确。仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。
相关热词:
等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
- 2004-08-30 09:23:16
- 标签:
- 收藏(0) 赞(0) 踩(0)
- 随时了解更多仪器资讯,求购、招标、中标信息实时更新,厂商招商信息随时看。大量、齐全、专业的仪器信息尽在仪器网(yiqi.com)。扫一扫关注仪器网官方微信,随时随地查看仪器用户采购、招标需求!
-
BCA蛋白浓度测定试剂盒2004-08-14 09:23:08
蛋白浓度测定试剂盒 货号:PC0020 规格 :500微孔(500T) 保质期 :有效期1年。 产品内容:
-
蛋白浓度测定的方法具体有哪些?2004-08-30 09:23:16
蛋白质浓度测定是利用化学或物理方法测定蛋白质浓度,一般蛋白浓度测定的方法有很多种,每种方法都有优点和局限性,
-
BCA 蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度的原理及特点2004-08-30 09:23:16
BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度的原理及特点碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA试剂形
-
Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用说明2004-08-30 09:23:16
保存条件:G250染色液4℃保存,蛋白标准-20℃保存,本试剂盒自订购之日起九个月内有效。Bradford蛋
-
昆明动物所等发现藏族人群血红蛋白浓度的海拔拐点2004-09-02 09:23:08
藏族人群的血红蛋白浓度与红细胞增多症检出率随海拔变化的非线性模型。A,血红蛋白浓度;B,红细胞增多症检出率。
-
BCA蛋白浓度测定2004-11-06 09:23:09
目录号规格价格PC0020-500500T280.00产品简介:Bicinchoninicacid(BCA)
-
如何测定蛋白浓度2004-11-06 09:23:09
考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质浓度1、试剂:(1)考马斯亮蓝试剂:考马斯亮蓝G250100mg
-
Lowry法蛋白浓度测定2004-11-06 09:23:09
目录号规格价格PC0030-10001000T280.00产品简介:Lowry法包括两步反应:第一步是在碱性
-
Bradford蛋白浓度测定2004-11-06 09:23:09
目录号规格价格PC0010-25002500T150.00产品简介:Bradford法是最常用的蛋白质快速定
-
考马斯亮兰法测定蛋白浓度的实验方法2004-11-29 09:23:27
(一)考马斯亮兰法实验原理双缩脲法(Biuret法)和Folin―酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限
简述bradford法测蛋白浓度实验过程
-
您可能感兴趣
①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:仪器网"的所有作品,版权均属于仪器网,转载时须经本网同意,并请注明仪器网(www.yiqi.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi