FISH技术在慢性淋巴细胞性白血病中的应用

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【导读】慢性淋巴细胞性白血病（chronicLymphocyticleukemia，CLL）是世界上最常见的白血病种类，在中国发生率较低，仅占慢性白血病的10%。与其他白血病不同，不同CL...

慢性淋巴细胞性白血病（chronicLymphocyticleukemia，CLL）是世界上Z常见的白血病种类，在ZG发生率较低，仅占慢性白血病的10%。与其他白血病不同，不同CLL患者之间病情差别非常大。因此，对于CLL患者，如何在病情初期便对其疾病进展情况、ZL有效性和生存期进行准确的预测显得尤为重要。CLL的临床分期主要包括Rai或Binet分期法。这些方法依靠体格检查和常规实验室检验，虽然也对患者的生存期做出一定的预测，但并不准确，且无法对疾病的进展、药物ZL的有效性等做出评估。为了克服这个缺陷，在常规临床分期以外还有多种技术被采用以弥补其不足.一：临床分期方法的局限性1.80%患者均处于临床早期阶段2.无法预测疾病的进展情况3.无法了解发病机制4.肿瘤负荷，如巨型淋巴结情况未被考虑5.无法预测资料有效性二:CLL预后判断检验方法常规实验室检验1.临床分析2.浸润程度分级3.血淋巴细胞计数4.血淋巴细胞倍增时间生物标志物检验1.细胞遗传学（染色体条带分析、FISH）2.免疫球蛋白重链变异区（IgVH）突变3.血清标志物在诸多新兴的检测方法中，FISH技术以其准确、方便、客观的优势得以脱颖而出。准确FISH技术直接检测特定基因的变化情况。正常细胞转化为肿瘤细胞必然伴随着内部基因的变化。且这种变化往往比相关蛋白的表达、临床症状的变化都要早，因此检测基因的变化情况能更好地对疾病进展进行预测。细胞中DNA的稳定性要远高于蛋白质，在样品处理过程中不容易对DNA造成损伤而影响检测结果，而蛋白质的检测就比较容易受到外界因素的影响。例如IgVH突变状态的主要标志物之一CD-38的检测就很容易受到时间因素的影响。目前已利用了FISH技术对CLL患者的预后进行多次回顾性实验，证明FISH的检验结果与患者的疾病进展、ZL的有效性、生存期长短密切相关，且与其它检测指标，如IgVH突变状态具有较好的一致性，可作为CLL患者预后判断的重要指标。方便在FISH技术开展以前，主要使用染色体条带技术对染色体变异情况进行检测。这种方法要求样本为分裂期细胞，而慢淋细胞在体外很难培养进入分裂期，只有40%左右的患者能检测出染色体异常。FISH技术对样本的要求相对宽松，可直接对间期细胞进行检测，检出率可达染色体条带技术的两倍。FISH技术目前已经有一套相当规范的实验流程，一般1-3个工作日即可提供检验结果，比计算淋巴细胞倍增时间或培养细胞进行染色体条带分析大大节约时间。且操作难度低，不需要像使用ZAP70检测IgVH突变那样仔细分离细胞。客观FISH检测的结果以荧光信号计数为基础，过程相对客观，不同实验者之间的一致性好，且结果的阴/阳性判断有固定的标准，便于不同实验室直接比较实验结果。而染色体条带技术则主观性较强，依赖于实验者的个人经验；在使用CD-38、ZAP70等替代性标志物进行IgVH突变状态检测时也缺乏统一的评判标准，导致不同实验室之间的检查结果大相径庭。“发现分子细胞遗传学技术（FISH）可以检测到80%慢性淋巴细胞性白血病患者的染色体变异，（检出率）差不多是染色体条带技术的两倍……”HartmutDhoneretal.新英格兰医学杂志常见生物标志物检测方法的优缺点。三：常见生物标志特检测方法一览表检测原理主要检测指标优点局限性细胞遗传学肿瘤细胞常伴有不同部位的基因突变，导致染色体某些特定区域的缺失、易位或扩增。13q14.1缺失、12染色体3体、ATM基因缺失、p53基因缺失预后相关性好：可从发病机制上进行研究；提供客观的评判标准。染色体条带技术检出率低，FLSH技术有时无法获得所需的探针。lgVHIgVH突变的细胞可能来源于SFZX后肿瘤，而未突变的细胞可能来源于SFZX肿瘤。IgVH区基因、CD38、ZAP-70IgVH突变情况可作为患者生存期限预测的重要指标。PCR检测过于昂贵；CD38和ZAP-70不够稳定，且缺乏客观的阳性判定指标。血清标志物肿瘤细胞在生长过程中常伴有某些蛋白质含量的变化。CD23、胸腺嘧啶激酶、β2小球蛋白与疾病的进展相关；和淋巴细胞倍增时间β浸润实验具有相关性。缺乏公认的阳性判别标准，缺乏足够的前瞻性研究证实其可靠性。

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2004-08-30 09:23:16

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