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HiFiScript快速去基因组cDNAdiyi链合成试剂盒说明书
HiFiScriptQuickgDNARemoval
cDNAKit
HiFiScript快速去基因组cDNAdiyi链合成试剂盒
目录号:YJ2582
保存条件:-20℃。
规格说明
Cat.No.YJ2582-25YJ2582-100
KitSize25100
gDNAEraser12.5μl50μl
10×gDNAEraserBuffer30μl120μl
HiFiScript,200U/μl25μl100μl
5×RTBuffer120μl500μl
PrimerMix30μl120μl
RNase-FreeWater1ml2×1ml
本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途
产品简介
本产品是用于去除基因组DNA进行反转录的试剂盒。该试剂盒在42℃,2min即可
除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有YZgDNAEraser的组分,经过gDNA
Eraser处理后的样品可以直接进行逆转录反应合成cDNA。本试剂盒配有新型GX反转
录酶HiFiScript,新颖突变位点大幅提升酶的转录活性,cDNAdiyi链合成的效率和产
量更高,可利用pg级的总RNA或mRNA合成cDNAdiyi链。如逆转录产物cDNA用于下
游荧光定量检测,可在42℃,15min完成逆转录反应。本试剂盒适用于diyi链cDNA的
合成和后续的RT-PCR、RT-qPCR、以及全长cDNA文库的构建等。
产品特点
1.快速去除基因组:含有去除基因组DNA的gDNAEraser,只需2min即可除去基因
组DNA。
2.快速逆转录:15分钟即可获得荧光定量PCR模板cDNAdiyi链合成。
3.灵敏度高:可利用pg级总RNA或mRNA模板合成cDNAdiyi链。
4.GX的逆转录效率:新颖突变位点大幅提升酶活性能,获得更高产量的cDNA。
注意事项
1.在操作过程中应避免RNase污染,防止RNA降解或实验中的交叉污染,建议操作人
员带口罩和一次性手套并经常更换手套,使用专门的仪器和耗材。
2.逆转录体系配制在冰上进行操作,防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于
-20oC保存,并尽量避免反复冻融。
3.反应体系可倍比放大,10μl反应体系可Zda使用1μg总RNA。
4.PrimerMix由Oligo(dT)和Randomprimer配制而成,也可根据实验需要选用
Oligo-dTPrimer或GeneSpecificPrimer。
5.若起始RNA的量小于50ng,建议加入RNA酶YZ剂(RNasin)。本试剂盒并未提
供,如需要可单独向本公司订购,货号为YJ0596。
6.对于二级结构复杂的RNA模板,建议在操作步骤之前,将模板RNA在65℃孵育5分
钟立刻置于冰上,短暂离心后进行下一步操作。
操作步骤
将模板RNA在冰上解冻;试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上。使用前将每种溶
液涡旋振荡混匀,并经短暂离心后使用。
一、去除基因组DNA反应
1.根据以下表格在冰上配制反应体系,总体积为10μl。为了保证反应液配制的准确性,先按反应数+2的量配制预混体系,然后再分装到每个反应管中,Z后加入RNA样品。
试剂10μl反应体系
10×gDNAEraserBuffer1μl
gDNAEraser0.5μl
RNATemplate1)10pg-1μg
RNase-FreeWaterupto10μl
注意:1)如果总RNA量大于1μg,请按比例扩大反应体系。若起始RNA的量小于50ng,则建议
加入RNA酶YZ剂(RNasin),该产品货号为YJ0596。
2.涡旋震荡混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。
3.42℃孵育2分钟(室温反应时,可以延长到30分钟)。
4.反应结束后,短暂离心,置于冰上冷却。
二、逆转录反应
1.根据以下表格在冰上配制反应体系,反应液配制请在冰上进行。为了保证反应液配置的
准确性,先按数+2的量配制成预混溶液,然后再分装10μl到每个反应管中,取配制的预混液10μl加入至已完成去基因组的步骤1反应管中。
试剂20μl反应体系
步骤1反应液10μl
HiFiScript,200U/μl1μl
PrimerMix1)1μl
5×RTBuffer4μl
RNase-FreeWater4μl
注意:1)可根据实验需要可使用Oligo-dTPrimer或GeneSpecificPrimer,建议20μl反应体Oligo-dTPrimer50pmol,或GeneSpecificPrimer2pmol。
混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底。3.cDNA合成反应条件:1)若下游进行荧光定量PCR检测,42℃孵育15分钟,85℃孵育5分钟。
2)若下游进行普通PCR检测,42℃孵育30-50分钟,85℃孵育5分钟。
注意:对于二级结构复杂或GC含量高的模板,可以提高逆转录温度至50℃,增强逆转录效率。
4.反应结束后,短暂离心后置于冰上,再进行后续PCR或荧光定量PCR,如果需要长时
间保存,请置于-20℃。
注意:进行Real-timePCR反应时,逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。
相关产品信息
目录号产品名称产品特点
YJ0580TRIzon总RNA提取试剂适用范围广的RNA提取试剂
YJ0581超纯RNA提取试剂盒兼具有适用范围广和纯度高特点的RNA提取试剂
YJ0597超纯RNA提取试剂盒(含DnaseI)
灵敏度高,可识别pg级别的模板。与RNA亲和力强,
YJ0741SuperRTcDNAdiyi链合成试剂盒
能够通读GC含量高,二级结构复杂的RNA模板。
YJ0744HiFi-MMLVcDNAdiyi链合成试剂盒GX获得cDNA产物
YJ2381SuperQuickRTcDNAdiyi链合成试剂盒(ForReal-timePCR)
逆转录(针对于荧光定量PCR)仅需15分钟,即可完成荧光定量PCR所需的cDNA
SuperQuickRTMasterMix即用型逆转录mix,只需加入RNA和水即可反应。仅
YJ2391(forReal-TimePCR)需15分钟,即可完成荧光定量PCR所需的cDNA
YJ0688EsTaqDNAPolymerase
兼具高扩增效率和高保真性的PCR产品
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YJ0956UltraSYBRMixture(WithROX)特异性强、Ct值低、定量更准确
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- 2004-08-31 09:23:06
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