免疫荧光染色之染色的注意事项

一：荧光抗体染色

于已固定的标本上滴加经适当稀释的荧光抗体。置湿盒内，在一定温度下温育一定时间，一般可用
25～37℃30min，不耐热抗原的检测则以4℃过一夜为宜。用PBS充分洗涤干燥。

荧光显微镜检查应在通风良好的暗室内进行。经荧光抗体染色的标本应在染色当天镜检，每次镜下观察时间以1～2h为宜，时间过长将使高压汞灯的发光亮度下降，荧光减弱，工作人员观察过久对眼睛也有不良影响。作油镜检查时，必须用无自发荧光的镜油。

二：影响荧光抗体染色的各种因素

.pH荧光素在溶剂中基本上处于离子化状态，因此，溶剂中的氢离子浓度对荧光强度的影响是极大的。每一种荧光素都有自己合适的pH值，它保持荧光素分子与溶剂之间的电离平衡。pH的改变可以引起荧光素荧光光谱的改变，并可造成荧光强度的降低。

.温度一般情况下，环境温度的升高对荧光染色有明显的影响。因为，温度升高可造成溶液粘滞性增加，溶剂和荧光素分子的动力增大，使荧光淬灭的可能性随之加大，这就使荧光素分子与其他分子之间的相互碰撞几率增加，因此，影响了荧光素的荧光强度。一般情况下，温度在20℃时，荧光素即开始表现温度淬灭作用。随温度升高，荧光淬灭作用就越强，可至荧光完全淬灭。温度在20℃以下，荧光素的荧光强度随温度的变化改变不明显，基本上保持恒量。因此，在适当的低温环境中进行荧光显微观察，可得到更好的效果。

.荧光素的浓度在溶液浓度较稀时，荧光强度随荧光素浓度增加而增加。当荧光素浓度增加到一定程度时，荧光强度达到Zda。再继续增加浓度，荧光素发生的光可能被邻近的分子吸收，使荧光强度下降。

.某些细胞固定剂对荧光素有明显影响如甲醛固定的细胞比不固定的细胞荧光强度减弱50%左右。虽然醇类固定剂也有轻微的淬灭荧光作用，但其影响较小。

.非特异性荧光染色免疫荧光染色除特异性荧光之外，还出现一些与靶抗原-抗体反应无关的荧光，统称为非特异性荧光。非特异性荧光染色可由于某些抗原的自发荧光及交叉反应等多种因素产生。有些非特异性荧光染色可通过对照进行鉴别与排除，有些则要通过对抗原的纯化、抗体的提纯、提高荧光抗体结合物的比例等方面寻找原因逐项清除。

上海信帆生物公司主要代理产品：
ELISA试剂盒：进口ELISA试剂盒,国产ELISA试剂盒,人elisa试剂盒，大鼠ELISA试剂盒，小鼠ELISA试剂盒等。
培养基：微生物培养基,显色培养基,BD培养基,gibco培养基等。
血清：胎牛血清,人血清,动物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原装血清。
生物试剂：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等进口试剂。
标准品对照品：进口对照品,进口对照药材,进口标准品.
抗体：一抗,二抗，流式抗体等。
放免试剂盒：进口放免试剂盒，国产放免试剂盒，进口美国凤凰等知名品牌放免试剂盒。
实验室代测服务：放免代测，WB实验，免疫组化代测，荧光定量PCR代测，病理细胞染色代测，生化实验代测等。

仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。

相关热词：

等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。