固体培养基配制实验

试剂、试剂盒

琼脂胰化蛋白胨NaClNaOH四环素

玻璃瓶烧瓶

一、极限培养基平板

800ml水加入15g琼脂，高压灭菌15min。然后加人200ml无菌的5X极限培养液和碳源。待冷却至50°C，加人补充成分。每个10cm平板倒入32~40ml培养基（每升培养基可制作25?30个平板）。于室温干燥2?3天，或将平板的上盖稍微打开，于37°C或在层流通风橱干燥30min，将晾干的平板包裹好储存于4°C。

二、丰富培养基平板

将水加人以下所列出的培养基配方的成分中，定容至1L，高压灭菌25mm。待冷却至50°C，加人补充成分。每个LB或H培养基平板倒人32~40ml培养基（每升培养基可制作25?30个平板），每个λ肉汤培养基平板倒人约45ml培养基（每升培养基可制作20个平板）。平板的干燥和保存如上所述。

1.H平板，每升

10g胰化蛋白胨

8gNaCl

15g琼脂

2.λ肉汤平板，每升

10g胰化蛋白胨

2.5gNaCl

10g琼脂

3.LB平板，每升

10g胰化蛋白胨

5g酵母提取物

5gNaCl

1ml1mol/LNaOH

15g琼脂或者琼脂糖

三、添加物

其他的抗生素和半乳糖苷

1.抗生素（如果需要）：

氨苄青霉素50μg/ml

四环素12μg/ml

2.半乳糖苷（如果需要）：

X-gal终浓度为20μg/ml

IPTG终浓度为0.Immol/L

四、顶层琼脂培养基

顶层琼脂培养基常用于将噬菌体或细胞在平板的表面均匀分布成一薄层。以1L的批量配制顶层培养基，高压灭菌15min使之熔化，冷却至50°C，轻轻旋转晃动使其混合均匀，分装至100ml瓶中。再次高压灭菌，冷却，拧紧盖子，于室温保存。使用前，用水浴或者微波炉熔化顶层琼脂，冷却至45?50°C并维持在该温度。顶层琼脂中琼脂的含量比普通平板的少，在该温度下，顶层琼脂可保持熔化状态数天。

1.LB顶层培养基，每升

10g胰化蛋白胨

5g酵母提取物

5gNaCl

7g琼脂

2.γ顶层球脂培基，每升

10g胰化蛋白胨

2.5gNaCl

7g琼脂

3.顶层琼脂糖培养基，每升

10g胰化蛋白胨

8gNaCl

6g琼脂糖

五、穿刺琼脂培养基

穿刺琼脂培养基用来保存菌株。加人胸腺嘧啶则可使thy-细菌生长。据认为，半胱氨酸可很大程度地延长细菌在穿刺培养物中的存活时间。

1.穿刺培养基，每升

10g营养肉汤

5gNaCl

6g琼脂

10mg半胱氨酸盐-Cl

10mg胸腺嘧啶

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