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转基因玉米NK603质粒分子标准物质
- 品牌:北京北方伟业
- 货号: GBW10086
- CAS编号:
- 产地:朝阳区
- 供应商报价: 面议
- 北京北方伟业计量技术研究院 更新时间:2022-04-02 15:02:30
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企业性质生产商
入驻年限第4年
营业执照已审核
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基本信息 产品编号 GBW10086 中文名称 转基因玉米NK603质粒分子标准物质
英文名称 Plasmid DNA Containing Genetically Modified NK603 Maize DNA Fragments
规格 500μl 形态 液态 存储条件 置于-70˚C冰箱中冷冻保存。 用途 蛋白质&核酸检测用标准物质/蛋白质&核酸检测用标准物质 注意事项 使用前应先从冰箱内取出,待完全溶解后再打开瓶盖使用样品开封后,应尽快恢复密封状态使用本标准物质制作标准曲线时,按照表1进行梯度稀释,然后再采用荧光定量PCR进行检测,引物和探针序列[2, 3]详见表2。 量值信息 组分 标准值 不确定度 单位 测序比值 1 0.04 基因比值 PCR比值 0.97 0.09 基因比值 质粒分子浓度 2.4 0.14 108拷贝数/微升 产品详情
转基因玉米 NK603 质粒分子标准物质
Plasmid DNA Containing Containing Genetically Modified NK603 Maize DNA Fragments
转基因玉米 NK603 质粒分子标准物质的研制可用于转基因玉米、食品和饲料等的检测、安全评 价、实验室质量控制、分析方法验证与评价、技术仲裁等。
一、样品制备
本标准物质是将转基因玉米 NK603 转化体特异性序列和内标准基因片段共同构建于 pEASY-T3 载 体,得到 pNIM-001 质粒分子[1],经提取,纯化和质量检测及均匀性初检合格后稀释至(2.40×108) copy/μL 进行分装。
二、溯源性及定值方法
该标准物质 NK603 转化体特异性基因片段和内标准基因(zSSIIb)片段拷贝数比值特性量值采用 测序法和数字 PCR 法定值;转基因玉米 NK603 质粒分子标准物质浓度特性量值采用同位素稀释质谱 方法和数字 PCR 方法定值。本标准物质通过使用满足计量学特性要求的制备方法、测量方法和计量 器具,保证其量值溯源性。
三、特性量值及不确定度
1. NK603 转化体特异性基因片段和内标准基因(zSSIIb)片段拷贝数比值
编 号
标准值及不确定度
GBW10086
测序比值
扩展不确定度(k=2)
PCR 比值
扩展不确定度(k=2)
1.00
0.04
0.97
0.09
2. 转基因玉米 NK603 质粒分子标准物质浓度
编 号
标准值(copy/μL)
扩展不确定度(k=2)(copy/μL)
GBW10086
2.40×108
0.14×108
四、均匀性和稳定性考察
按照 JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》,采用采实时荧光定量 PCR 方法对 该标准物质进行均匀性检验研究,最小取样量 5μL,结果表明均匀性良好。按照先密后疏的原则采 用实时荧光定量 PCR 方法对该标准物质进行稳定性考察研究,标准值无方向性变化并通过平均值一 致性检验,表明稳定性良好。
本标准物质自定值日期起,有效期为 6 年,研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性,有 效期内如发现量值变化,将及时通知用户。
五、包装、储存及使用
1.包装与储存:本标准物质采用 2mL 立式拧口塑料离心管包装,500μL/瓶。建议-70?C 低温长期 保存。
2.使用注意事项:使用前应先从冰箱内取出,平衡至室温后再打开瓶盖使用。样品开封后,应 尽快恢复密封状态。
3.使用建议:使用本标准物质制作标准曲线时,按照表 1 进行梯度稀释,然后再采用荧光定量 PCR 进行检测,引物和探针序列[2, 3]详见表 2。
表 1 转基因玉米 NK603 质粒分子标准物质梯度稀释说明
初始浓度
(copy/μL)
终浓度
(copy/μL)
转化体特异性基因检测 a
内标准基因
(zSSIIb)
检测 b
DNA 缓冲液
(μL)
质粒 DNA (μL)
稀释倍数
2.4×108
4.8×106
490
10
50
4.8×106
2.4×105
E
380
20
20
2.4×105
2.4×104
T
E
180
20
10
2.4×104
2.4×103
T
E
180
20
10
2.4×103
4.8×102
T
200
50
5
4.8×102
2.4×102
T
E
100
100
2
2.4×102
48
T
E
80
20
5
a T 表示用于测定转化体特异性基因时所需的质粒分子标准物质的稀释浓度
b E 表示用于测定内标准基因基因时所需的质粒分子标准物质的稀释浓度
表 2 外源基因和内标准基因的引物及探针序列
基因名称
引物或探针
序列信息 (5’-3’)
扩增片段
长度/(碱基)
外源基因
NK603
上游引物
ATGAATGACCTCGAGTAAGCTTGTTAA
108
下游引物
AAGAGATAACAGGATCCACTCAAACACT
探针
FAM-TGGTACCACGCGACAGACTTCCACTC-TAMRA
内标准基因
zSSIIb
上游引物
CTCCCAATCCTTTGACATCTGC
151
下游引物
TCGATTTCTCTCTTGGTGACAGG
探针
FAM-AGCAAAGTCAGAGCGCTGCAATGCA -TAMRA
声明
1.本标准物质仅供实验室研究与分析测试工作使用。因用户使用或储存不当所引起的投诉,不予承担责任。
2.收到后请立即核对品种、数量和包装,相关赔偿只限于标准物质本身,不涉及其他任何损失。
3.仅对加盖“ZG计量科学研究院标准物质专用章”的完整证书负责。请妥善保管此证书。
4.如需获得更多与应用有关的信息,请与技术咨询部门联系。
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