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pcr总是p不出来,有什么需要注意的吗?

DFC623385    2016-05-09       浏览 5450 次

我在做16s测序,pcr怎么p都p不出来,哪位大神可以告诉我pcr体系有什么具体要求吗?或者是在什么地方需要注意吗?

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未认证会员 发布日期:2016-05-09 10:53:06
现在的状况建议先做阳性对照进行判断:
1.用这对引物,但是换用曾经成功P出来过的模板,或者肯定能P成功的模板.有结果,则模板需要重新制备,没有结果,则需要进一步做2.
2.换引物和模板,看PCR体系中,其他成分(酶,dNTP,buffer等)是否工作.有结果,确定是模板问题,没有结果则模板和引物都可能有问题.

如果问题出在模板上,需要重新抽提基因组DNA,电泳检测抽提效果,Z好能够DNA定量后再继续进行PCR.
如果确定引物有问题,可以重新合成引物.因为16S的引物多半是通用型的,所以实验条件上需要改动的地方并不多,退火温度可能变动几度就好了.但引物降解有可能造成扩增失败.
一样样试过吧
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