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ctab法提取dna 提取DNA、RNA前为什么要进行高压灭菌

谁D尐寶呗ル    2012-06-19    核酸提取仪    浏览 1133 次

精彩问答
af05522 发布日期:2016-03-30
CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来.
CTAB提取缓冲液的经典配方
Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,YZDNase活性;
NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,在于液相中; CTAB溶解细胞膜,并结合核酸,使核酸便于分离;
β-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除
PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖.
用酚抽提细胞DNA时,有什么作用?
使蛋白质变性,同时YZ了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.
使用酚的优点:1.有效变性蛋白质;2YZ了DNase的降解作用.缺点:1.能溶解10-15%的水,从而溶解一部分poly(A)RNA.2.不能完全YZRNase的活性.
氯仿的作用?
氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层.
Z后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚.(酚易溶于氯仿中)
用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?
异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡.异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生.另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定.
用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子?
用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl 或 NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀.
简言之,无论哪种抽提方法,药品的作用基本都是一样的
全部评论
wq1102521807 发布日期:2012-06-28
当然要灭菌啊,要是提取液里有杂菌,很容易提出杂菌的DNA和RNA啊~
vg枯产喏 发布日期:2012-06-20
我做过CTAB提前取,其实提DNA的话是无所谓的,毕竟DNAase没这么多哦。提RNA的时候要注意高压灭菌,主要是对RNAase进行灭活,防止其对RNA的降解。不知道你是准备做什么,一般提取植物用CTAB多一点哦。如有问题继续追问。
asd704616717a 发布日期:2012-06-20
怕有DNAase和RNAase把要提取的东东都降解了!
a340244226 发布日期:2015-09-26
否则会混入细菌的DNA和rna
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