为什么要用pH8的Tris水溶液饱和酚?呈粉红色的酚可否使用?如何保存酚不被空气氧化?
答:由于酚与水有一定的互溶,抽提DNA过程中,不会造成样品中含有DNA的水分被吸收,使得DNA的损失减少为苯酚用水饱和的目的。使用Tris将pH调节为8,是由于在此条件下,DNA比较稳定。在中性或碱性条件下(pH5~7),和DNA相比较,RNA游离到水相更加的容易,因此能够使RNA含量较少的DNA样品获得。在冰箱中保存的酚,容易被空气氧化而变成粉红色的,DNA容易受到这样的酚的作用而降解。为了使酚的氧化diyi避免,能够将疏基乙醇和8-羟基喹琳加入直到至终浓度为0.1%。8-羟基喹琳是固体粉末,带有淡黄色,不但可以氧化,还能够在一定程度上对DNase的活性起到YZ作用,其为金属离子的弱螯合剂。使用TrispH8.0水溶液饱和后的酚,Z好在棕色小试剂瓶里分装,将一层Tris水溶液或TE缓冲液在上面盖上,使空气隔绝,将其装满盖紧盖子Z好。若有可能,能够将氮气充入,使与空气接触而被氧化得以避免。平时在4℃或-20℃冰箱中保存,使用时,将盖子打开吸取后将盖子迅速盖上,如此能够使酚可用数月不变质。
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