实验室用户必备：Thermo Fisher液相色谱仪、色谱柱如何维护？

Thermo Fisher 液相色谱维护时间表

如何保证良好的柱性能与柱寿命?

1. 认证阅读色谱柱使用说明书；使用填充良好的色谱柱；使用保护柱及在线过滤器；尽量减少压力波动，避免机械及热冲击。

2. 经常以强溶剂冲洗色谱柱；充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与强保留成分；用稳定的固定相（C18Z稳定）；在中等PH值操作（6~8），用有机缓冲溶液；色谱柱使用温度应当小于40℃。

3. 硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的PH值范围在3.0~8.0；在水流动相与缓冲溶液中加200ppm的叠氮钠；流动相中含有缓冲溶液，应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5%；过夜或贮存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存（建议乙晴）。

如何解决色谱柱使用过程中的问题？

一.色谱峰（不对称）拖尾的原因

1. 色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；

2. 柱头有污染；

3. 样品超载；

4. 样品溶剂不合适；

5. 柱外效应；

6. 化学或二次保留（硅羟基）效应；

7. 缓冲容量不足或不合适；

8. 重金属污染。

二.如何解决峰形拖尾的问题

A．与化学有关的拖尾问题

1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用与碱性化合物）或醋酸胺（用与酸性化合物），未

知化合物加醋酸三乙胺；

2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；

3．降低进样量至《1ug。

B．与色谱柱有关的拖尾问题

1．如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲

醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。

2．使用保护柱

C．与HPLC 系统有关的峰拖尾和峰加宽

1．进样体积过大，（通常≤25uL）；

2．进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（适合连接管应《20cm，内径为0.007〃）；

3．检测器流通池的体积过大。

三.如何储存色谱柱

1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以YZ细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加

20%的有机改性剂，也可YZ微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。

2．尽可能将色谱柱贮存于有机溶剂（乙晴）中，避免在缓冲溶液中保存。

3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成有机溶剂储存。

4．避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。

5．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。

原文地址：http://www.easylabplus.com/index-news-describe-html-614.html