通过人工合成获得真核细胞基因
(1)、结构基因的核苷酸序列以及相应的 mRNA序列通过已知蛋白质的氨基酸序列推测出来,然后再以单核苷酸为原料通过化学方法进行合成。
(2)、将mRNA作为板,逆转录成互补的单链DNA,之后在酶的作用下,使双链DNA合成,从而使所需要的基因获得。
往载体克隆
质粒为常用的载体,外源基因和质粒利用同样限制性内切酶切断,质粒与外源基因在DNA连接酶作用下结合,使得一个重组DNA分子形成。
转化和表达
在生物体内通过载体带入外源基因并使它得到表达。土壤农杆菌、动植物细胞、枯草杆菌、大肠杆菌等为常用的受体细胞。当在受体细胞内导入外源基因后,随着受体细胞的繁殖,外源基因会复制。
筛选和检测
真正能够摄入外源基因的受体细胞在全部受体细胞中都是很少的。所以细胞中是否导入了外源基因必须通过一定的手段进行检测 ,有多种检测的方法。
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