近日,ZG科学院过程工程所(IPE)生化工程国家ZD实验室生物剂型与生物材料课题组与清华大学(THU)及天津大学(TJU)合作,基于无定形金属有机框架开发出一种新剂型,可实现酶分子的细胞内GX递送和催化,在单细胞水平上实现细胞代谢产物的原位检测。该工作发表于Nature Communications 2019,10,5165,题目为"Packaging and delivering enzymes by amorphous metal-organic frameworks"。
受限于细胞膜的屏障作用和细胞内的降解因素,外源的酶分子难以进入细胞内发挥GX的催化反应。为解决上述难题,本论文的研究团队制备了新型的无定形态金属有机骨架纳米颗粒,用于酶分子的负载。该剂型能够克服细胞膜屏障,将酶分子GX递送进细胞中;同时利用纳米颗粒的保护作用,保证酶分子的天然活性;进一步借助无定形态金属有机骨架的介孔结构(3-6 nm,晶态结构仅1 nm),强化底物和产物的传质扩散(图1 a-d)。基于上述优势,该剂型可用于细胞内代谢产物的原位检测。以葡萄糖为例,经过该剂型催化后的产物可以与相应的荧光探针反应,借助高内涵技术在单细胞水平上实现无损伤的实时定量检测,细胞在96孔板中贴壁24小时后,加入纳米颗粒包装的葡萄糖氧化酶及底物荧光探针,使用Operetta CLS高内涵系统连续观察4小时(37 °C and 5% CO2),输出各组长时间细胞荧光图像。使用Harmony分析软件计算获得单细胞荧光信号变化数据,结果显示葡萄糖代谢活跃度高的肿瘤细胞显示更高的荧光强度(HepG2>4T1>MCF-7>MGC803)。此方法可用于细胞代谢状态的判断以及正常细胞和癌细胞的区分(图1 e-j),相比传统的化学方法,保证精确度的同时实现了活细胞无损伤原位葡萄糖代谢检测,为慢性病的监控和癌症的早期诊断提供了新思路。
图1 无定形金属有机框架纳米剂型的构建及其在细胞代谢物原位检测中的创新应用。无定形纳米载体(a)及酶-无定形纳米载体复合物(b)的扫描电镜图;(c)Cryo-EM成像显示无定形载体的结构;(d)酶分子经过负载后的表观活性;不同代谢状态下细胞的荧光强度变化图(e)以及对应高内涵图像(f)正常肝细胞(橙色)和肝癌细胞(蓝色)的荧光强度变化图(g)以及对应高内涵图像(h);(i)不同细胞胞内葡萄糖浓度和荧光强度的关系;(j)每种细胞荧光强度达到峰值时的对应图像。
吴晓玲博士(THU)、岳华副研究员(IPE)和博士生张原宇(THU)为本文共同diyi作者,戈钧长聘副教授(THU)、魏炜研究员(IPE)、张麟教授(TJU)和李赛研究员(THU)为本文共同通讯作者。该研究得到国家自然科学基金青年基金以及国家ZD研发计划项目等支持。
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