大鼠骨保护素（OPG）定量检测试剂盒（ELISA）

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www.biokanu.com本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。大鼠骨保护素（OPG）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】大鼠骨保护素（OPG）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中骨保护素（OPG）的含量。【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠骨保护素（OPG）抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠骨保护素（OPG）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠骨保护素（OPG）含量。【试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7显色剂A液6mL2标准品（1200ng/L）0.5mL8显色剂B液6mL320倍浓缩洗涤液25mL9终止液6mL4样本稀释液6mL10说明书1份5标准品稀释液6mL11封板膜2张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液倍比稀释为：1200、600、300、150、75、37.5ng/L.【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱标准规格酶标仪精密移液器及一次性吸头蒸馏水一次性试管吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。9、显色：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。Z终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。【样本要求】1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的YZ剂。2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。【注意事项】1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。5、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。6、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。7、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。8、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。【操作程序总结】准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟加入终止液15分钟之内读OD值计算【检测范围】37.5ng/L-1200ng/L【规格】96T/盒【贮藏】2-8℃，避光防潮保存。【有效期】6个月
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