小鼠的染色体制备

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实验原理小鼠细胞有高度的分裂活性，并且数量非常多，因此不必进行体外培养，可直接观察到分裂期细胞。处于分裂期的细胞经秋水仙素处理，阻断纺锤丝的形成，使细胞分裂停止于中期，此时染色体达到Zda收缩，具有典型的形态。低渗处理使细胞破裂，便于染色体分散。该方法在临床上多用于白血病的研究，也可用于观察毒性物质对机体遗传物质染色体损伤的状况。小鼠染色体2n=40，均为端着丝粒染色体，雄性为40，XY，雌性为40，XX。实验试剂1.0.85％生理盐水2.固定液（甲醇∶冰醋酸为3∶1）3.PBS（pH6.8）4.Giemsa染液5.秋水仙素（以100μg/ml的浓度溶于0.85％生理盐水中）6.0.075mol/LKCl实验设备1.显微镜2.恒温水浴锅3.低速离心机4.电子天平5.解剖器械（搪瓷解剖盘、剪刀、镊子）6.注射器7.针头8.试管及试管架9.滴管及载玻片实验材料小鼠实验步骤1.秋水仙素处理：取前3h先给小鼠腹腔注入秋水仙素，注射剂量为100μg／kg动物体重。2.取：用损伤脊髓法处死小鼠，然后用剪刀剪开大腿上的皮肤和肌肉，取出大腿骨，用一小块纱布搓干净附在骨上的肌肉碎渣。剪掉股骨两端膨大的关节头，然后用注射器吸取5ml0.85％生理盐水，插入股骨一端，将细胞冲洗至10ml的离心管中。可重复冲洗多次，直至腔呈白色为止。3.低渗处理：将所获得的细胞悬浮液以1000rpm离心10min，吸去上清液，留0.2ml沉淀物，加0.075mol/LKCL溶液（37℃）至8ml刻度，将细胞沉淀物吹散打匀，在37℃水浴低渗25min。4.固定：低渗处理后，立即加入1ml新配制且预冷的固定液，抽打均匀，然后1000rpm离心10min，弃上清。沿管壁加固定液至6ml，吹散细胞后静止固定10min，即**次固定。按上述条件离心，去上清液，再次加入固定液至6ml，进行第二次固定。10min后离心吸去上清液，留0.2ml沉淀物，再往沉淀物中滴加4滴固定液，冲匀制成细胞悬液。5.滴片：取事先在冰箱中预冷的载玻片，从约15cm高处向每个载玻片上滴1～2滴细胞悬液于粘有冰水的载玻片上，晾干。6.染色：取制片平放在玻璃板上，用1∶9Giemsa染液染色20min，流水冲洗后晾干。7.观察：小白鼠染色体的形态特征，并计算2n的染色体数目。
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