GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶标记试剂盒
- 上传人: 上海科学仪器有限公司 |大小:123.95KB|浏览:669次|时间:1970-01-01
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GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶标记试剂盒产品说明书主要用途GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶标记试剂是一种旨在使用同位素([γ32P]ATP)和cAMP依赖性蛋白激酶A(proteinkinaseK),标记纯化的目标融合蛋白,成为敏感探针的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种GST融合的重组蛋白。其应用于后续远西方杂交(FARWESTERNBLOT)印迹实验和印迹覆膜结合(BLOTOVERLAYBINDING)实验等。产品即到即用,性能稳定,操作便捷,反应敏感,重复性好。技术背景谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase;GST)融合蛋白(fusionprotein)的技术,广泛应用于蛋白与蛋白之间相互作用的研究、抗体的制造和纯化、以及生化分析。基于GST融合蛋白由GSTmoietry、蛋白酶切离部位和已知激酶磷酸化部位构成,使用同位素([γ32P]ATP)和cAMP依赖性蛋白激酶A(proteinkinaseK),标记纯化的目标融合蛋白,作为敏感的探针,在远西方杂交(FARWESTERNBLOT)印迹实验或印迹覆膜结合(BLOTOVERLAYBINDING)实验中,探测和分析结合蛋白或多肽结构域。GST融合蛋白同位素([γ32P]ATP)激酶标记是蛋白组学研究的常用工具。产品内容缓冲液(ReagentA)毫升标记液(ReagentB)微升(用户自备)反应液(ReagentC)微升酶促液(ReagentD)微升产品说明书1份保存方式保存在-20℃冰箱里;有效保证6月用户自备[γ32P]ATP同位素:用于同位素标记1.5毫升离心管:用于样品反应操作和保存的容器干式恒温仪:用于标记孵育液体闪烁计数器(liquidscintillationcounter):用于同位素活性测定实验步骤1.准备好纯化的GST融合蛋白2.移取xx微升缓冲液(ReagentA)到1.5毫升离心管3.加入2.5微升用户自备的GST融合蛋白(总量为10微克)4.加入xx微升标记液(ReagentB)(注意:同位素总量为10毫居里/毫升;5000居里/毫摩尔)5.加入xx微升反应液(ReagentC)6.加入xx微升酶促液(ReagentD)7.枪头上下抽吸混匀8.放进30℃干式恒温仪孵育30分钟9.放进-70℃保存或置于冰槽里备用10.或使用5至10微升(107CPM)标记蛋白继续后续远西方杂交(FARWESTERNBLOT)印迹实验和印迹覆膜结合(BLOTOVERLAYBINDING)实验等注意事项1.本产品为20次操作2.本产品的标记效率可达60%以上3.操作时,须戴手套4.操作时,严格无菌5.同位素操作须严格遵守规章制度6.建议使用带滤芯的枪头进行操作7.同位素[γ32P]ATP(1居里=37GBq),建议使用ICN或AMERSHAM(安玛西亚)公司8.由于[γ32P]同位素的半衰期短,建议使用新鲜同位素材料;且标记后即刻使用9.可以直接在GST融合蛋白树脂上进行标记,然后常规洗脱或凝血酶(THROMBIN)切离纯化;纯化后进行同位素活性测定10.本公司提供系列同位素处理试剂产品质量标准1.本产品经鉴定性能稳定2.本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
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