蓝色荧光染色体核型分析试剂盒产品说明书

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主要用途蓝色荧光（DAPI）染色体核型分析试剂是一种旨在通过使用荧光染料DAPI与染色体DNA的结合并发出荧光检测信号来显示染色体带型特征而构成细胞染色体核型的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。该荧光分析是细胞遗传学中的Zxin研究技术。适用于各种生长中的动物或人体细胞。产品即到即用，性能稳定，荧光清晰。技术背景作为细胞DNA染色剂之一的4,6-二咪基－4-联苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特异性地与DNA双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与DNA的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激发波长356nm，使得DAPI成为了一种常用的荧光检测信号。通过DAPI的染色显示其带型特征，然后根据体细胞中全套染色体形态特征和大小顺序排列，并依次配对、分组，构成该个体的核型或染色体组型，从而可以识别和分析染色体结构和数量的异常，成为产前诊断或肿瘤细胞遗传学的工具。产品内容清理液（ReagentA）毫升滞态液（ReagentB）毫升低渗液（ReagentC）毫升固定液A（ReagentD）毫升固定液B（ReagentE）毫升预备液（ReagentF）毫升染色液（ReagentG）毫升抗淬灭剂（ReagentH）毫升产品说明书1份保存方式保存滞态液（ReagentB）和染色液（ReagentG）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；滞态液（ReagentB）、染色液（ReagentG）和抗淬灭剂（ReagentH），避免光照，有效保证6月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液：用于细胞脱离完全细胞培养液：用于细胞培养无离子水：用于清洗染色的载玻片50毫升锥形离心管：用于细胞处理的容器37℃恒温水槽：用于预热试剂溶液台式离心机：用于沉淀细胞小型染色缸：用于载玻片染色的容器载玻片：用于细胞涂片和染色显微镜：用于观察细胞分裂和染色体组型实验步骤实验开始前，将试剂盒里的固定液A（ReagentD）和B（ReagentE）从4℃的冰箱里取出，移取A液xx毫升和B液xx毫升加入到50毫升锥形离心管，混匀后标记成为固定工作液，置入冰槽里。同时在37℃恒温水槽里预热清理液（ReagentA）、滞态液（ReagentB）、低渗液（ReagentC）。然后进行下列操作。限定细胞在有丝分裂中期（METAPHASE）1）贴壁细胞处理抽去铺满生长细胞的75cm2细胞培养瓶的培养液加入xx毫升清理液（ReagentA）到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，小心抽去清理液（ReagentA）加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面放进37℃培养箱孵育3分种手击振动培养瓶，使细胞脱落加入15毫升用户自备的完全细胞培养液，充分混匀移出10毫升混匀物到新的75cm2细胞培养瓶加入10毫升用户自备的完全细胞培养液到上述新的75cm2细胞培养瓶放进37℃细胞培养箱孵育16至20小时小心抽去铺满70％生长细胞的75cm2细胞培养瓶的培养液加入10毫升用户自备的完全细胞培养液加入xx微升37℃预热的滞态液（ReagentB），轻轻摇动细胞培养瓶，使其混匀放进37℃细胞培养箱，孵育2小时在显微镜观察下，细胞开始收缩变圆，表明细胞处于有丝分裂手击振动拍打培养瓶，使细胞脱落移出含有滞态液（ReagentB）的细胞培养液到50毫升锥形离心管加入xx毫升清理液（ReagentA）到培养瓶，清洗整个细胞表面移出清理液合并到50毫升锥形离心管加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面置入37℃培养箱3分种手击振动培养瓶，使细胞脱落加入10毫升用户自备的完全细胞培养液，充分混匀移出混匀物合并到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液（保留0.3毫升）手指轻弹混匀细胞2）悬浮细胞处理准备好108悬浮细胞（淋巴细胞、白细胞、细胞等）移入到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液（选择步骤）加入xx毫升清理液（ReagentA），混匀颗粒群（选择步骤）放进台式离心机离心5分钟，速度为300g（选择步骤）小心抽去清理液（ReagentA）加入15毫升用户自备的RPMI1640完全细胞培养液，充分混匀细胞颗粒群转移到到新的75cm2细胞培养瓶放进37℃细胞培养箱孵育16至20小时移入到50毫升锥形离心管放进台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入10毫升用户自备的RPMI1640完全细胞培养液，混匀细胞颗粒群加入xx微升37℃预热的滞态液（ReagentB），混匀放进37℃细胞培养箱，孵育2小时在显微镜观察下，细胞开始收缩，表明细胞处于有丝分裂放进台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液加入10毫升用户自备的RPMI1640完全细胞培养液，充分混匀放进台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液（保留0.3毫升）手指轻弹混匀细胞二．低渗处理有丝分裂细胞用滴管一滴一滴加入xx毫升37℃预热的低渗液（ReagentC）到50毫升锥形离心管，轻轻摇动放进37℃细胞培养箱孵育15分钟放进台式离心机离心5分钟，速度为300g小心抽去上清液（保留0.3毫升）手指轻弹混匀细胞三．固定细胞1．用滴管一滴一滴加入xx毫升预冷的固定工作液到50毫升锥形离心管，轻轻摇动2．放进冰槽里孵育至少5分钟3．放进台式离心机离心5分钟，速度为300g4．小心抽去上清液（保留0.3毫升）5．手指轻弹混匀细胞6．重复上述步骤1至5，直到沉淀细胞颗粒群为白色（越白越好）7．加入5毫升固定工作液到50毫升锥形离心管，充分混匀四．染色体载片制作1．先将载玻片置于冰箱里冷却，然后放在实验台上，并排放上5至10张2．从高达30至60厘米处向下滴上3滴细胞混匀液在载玻片上，立即吹散开，使其散开或然后拿起载玻片，轻轻拍击手掌（注意：参见注意事项8）3．在显微镜下观察有丝分裂中期的细胞4．空气中晾干载玻片（注意：参见注意事项8）5．可以保存在70％酒精里，放进4℃冰箱长达一年。剩下的在固定液里的细胞可以长期保存在－20℃冰箱里五．染色加入xx毫升预备液（ReagentF）到小型染色缸（Coplinjar）放进晾干的载玻片孵育30秒取出载玻片，加上xx微升染色液（ReagentG），铺满整个细胞表面置入暗室3分钟放进含有预备液（ReagentF）的小型染色缸孵育30秒取出载玻片，用用户自备的无离子水轻轻冲洗3次在暗室里晾干加上xx微升抗淬灭剂（ReagentH）封片在荧光显微镜紫外波长下，观察呈现蓝色的细胞染色体将荧光图像转换为黑白图像，显示G带条带进行分析
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