小鼠心肌细胞培养操作说明
- 上传人： 上海研生实业有限公司 |大小：14.5KB|浏览：1217次|时间：2018-11-26
-
- 文档简介
- 您可能感兴趣的资料
-
PA_应用案例_动物细胞培养CO2在线监测
-
金坛亿通可吸入颗粒分析仪按键操作说明
-
CO150 CO2培养箱细胞培养兵工厂
-
动物细胞培养实验室构建方案
-
高速离心机在动物细胞培养及外源基因的导入的应用
-
离心机在细胞培养及外源基因中的应用
-
高速冷冻离心机细胞培养基本技术概述三.pdf
-
高速冷冻离心机细胞培养基本技术概述二.doc
-
高速冷冻离心机细胞培养基本技术概述一.pdf
-
神经组织细胞培养
小鼠心肌细胞培养操作说明小鼠心肌细胞比乳鼠心肌难养，用无血清培养基，呈杆状，横纹清楚，在培养基里细胞不搏动。小鼠心肌细胞分离一般是采用二型胶原酶分离，浓度为1mg/ml（用无钙台氏液配制），同时酶液里加入牛磺酸，BSA。一般采用Langendorff灌流的方法，大鼠开胸后，迅速取出心脏，放入冰的台氏液中，找到主动脉后，挂上Langendorff装置，衡流泵灌入无钙台氏液（37度），开始心脏会搏动几下，这样把心脏中的淤血挤出（此处也有人用有钙台氏液灌流，好让心脏充分搏动，把淤血挤出，不过我们摸索发现只要取心脏到挂上去的时间短，一般搏动几下就能把淤血清楚干净了）。几分钟后，换酶液开始灌流心脏，一般开始时，心脏较软，待消化一段时间后变硬，继续消化后又变软，且心脏发白，这时候就可以停止消化，将心室剪下，放入KB液中，用剪刀剪碎后，用滴管吹打，取上清，继续加入KB液，吹打，直到上清液不浑浊为止，一般吹打3－4次即可。将各次上清合并，吹打过滤后，沉降20分钟左右，弃上清，加入无血清培养基（MEM，不含L－谷氨酰胺，并加入肌酸，牛磺酸，BSA，肉毒碱，HEPES），吹打，1000转/分离心半分钟，弃上清，再洗1－2次后，将沉淀加入到6％的BSA中沉降15－20分钟（纯化心肌细胞），然后计数，点板或培养。 此法中如果各步注意无菌操作，Z后先用加倍双抗的培养基培养24h后，再换正常培养基，可适用于条件不是很好的试验室。如果能在板或瓶内加入Laminin处理后，贴壁很好。如果分离出来的心肌细胞，逐级复钙后培养，状态更好。**状态此中方法能培养7天以上。
标签：
