人核转录因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒操作步骤
- 上传人: 上海易利生物科技有限公司 |大小:37.5KB|浏览:715次|时间:2018-12-30
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人核转录因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒操作步骤使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中核转录因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人核转录因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)水平。用纯化的人核转录因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入核转录因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65),再与HRP标记的核转录因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的核转录因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人核转录因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)浓度。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。480pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液240pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液120pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液60pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液30pg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月
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