一文教你如何在Western Blot中选择一抗?
- 上传人: 艾普拜生物科技(苏州)有限公司 |大小:308.37KB|浏览:927次|时间:2019-11-18
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说到免疫印迹Z重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体,本文着重给大家介绍一下一抗的选择。
一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型,如鼠抗,兔抗,羊抗等等,那么在使用时我们应该怎么选择呢?
检测任何一种目的蛋白都有不止一种抗体可供选择,为了在试验过程中尽快找到Z适合的抗体,往往需要考虑以下几种因素:
1.确定自己的实验类型。如WB、IHC、ICC、ELASA等。一般的抗体说明书上都会给出该抗体适用于哪一种分析类型。
2. 单克隆or多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但极易出现非特异性条带。
3.确定自己的实验样本的结构信息。不同的抗体是由不同的免疫原(全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体或细胞等)免疫宿主而制备得来,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果检测的样本是蛋白片断或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段结构域的免疫原制备出的抗体。还有一点就是样本的制备过程,有些抗体要求样本经过某些特殊处理
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