浓缩还原橙汁饮料中果汁含量快速检测

果汁含量是浓缩还原橙汁的主要质量指标,也是判定其是否掺假的重要依据。本研究发现:不同产地、不同果汁含量的浓缩还原橙汁饮料中,可溶性物质在 325nm紫外波长处有特征吸收,并且与22种常用添加剂溶液的紫外吸收有明显区分;采用自主研制的快速检测设备,将橙汁中可溶性物质按分子量大小分 离,325nm下连续检测,得到橙汁可溶性物质按分子量大小分布的紫外特征吸收峰,其峰面积与橙汁含量呈现正相关;以巴西浓缩还原橙汁为标准参 照,用外标法计算果汁含量。该方法样品前处理简单,只需过滤、超声,即可经凝胶色谱柱分离、检测;色谱柱分离和325nm的检测波长,有效避免了22种常 用添加剂对果汁含量检测的干扰;该方法精密度高(RSD6.0%)、线性关系好(R2=0.9988)、抗干扰性强,可用于果汁含量大(等)于10%的橙 汁饮料中原果汁含量的快速、大批量检测。

★标准及限量

·GB 10789-2007 饮料通则

《饮料通则》中指出，果汁饮料中的果汁（浆）含量要大于等于10%，果肉饮料中的果浆含量不得低于20%，水果饮料中的果汁含量需在5~10%。

GB 19297-2003 果蔬汁饮料卫生标准

·GB/T 18963-2012《浓缩苹果汁》

·GBT 27305-2008 食品安全管理体系 果汁和

·GB 17325-2005 食品工业用浓缩果汁卫生标

★相关政策法规

根据国家标准《饮料通用分析方法》，我国只有针对橙、柑、橘浓缩汁和果汁以及饮料的果汁含量检测标准方法，对其他类别果汁的含量并没有可测定的标准。这也就这意味着，大多数果汁无据可依，标注在多种果汁饮料背后的果汁含量数据，对于一些果汁企业来说很可能就仅仅是一个数字而已。

★检测方法

方法一：钾的测定 

1、方法原理： 

钾的基态原子吸收钾空心阴极灯发射的共振线,吸收强度与钾的浓度成正比。将处理过的样品吸人原子吸收分光光度计的火焰原子化系统中,使钾离子原子化,在共振线766.5nm处测定吸光度,与标准系列溶液比较,确定样品中钾的含量。添加适量钠盐,消除电离千扰。 

2、试液的制备 

称取一定量经混合均匀的样品(浓缩果汁1.00g~2.0Og;果汁5.00g~10.00g;果汁饮料 20.0g~50.Og;水果饮料和果汁型碳酸饮料50.0g~lO0.0g)于500mI'凯氏烧瓶中,加人2粒~3粒玻璃珠、10mL~15mL硝酸(C.2.1)、5mL硫酸(C.2.2)(称样量大于⒛ g的样品。应预先加热除去部分水分,待瓶中样液剩余约20g时停止加热,冷却,冉加硝酸、硫酸),浸泡约2h或静置过夜。先用微火加热,待剧烈反应停止后,加大火力。溶液开始变为棕色时,立即滴加硝酸。直至溶液透明,颜色不再变深为止。继续加热数分钟至浓白烟逸出,冷却,小心加入20mL水,再加热至白烟逸出,冷却至室温。将溶液转移到50mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,备用。取相同量的硝酸、硫酸,按上述步骤做试剂空白消化液,备用。

 3、分析步骤 

3.1工作曲线的绘制 

吸取0.00mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL钾标准溶液(C.2.6),分别置于50mL容量瓶中,加10mL硝酸溶液、2.0mL氯化钠溶液,用水定容至刻度,摇匀,配制成0.0mg/L、2,0mg/L、4.0mg/L、8.0mg/L、12.0mg/L、16.0mg/L、20.0mg/L钾标准系列溶液。 

依次将上述标准系列溶液吸入原子化系统中,用0.0mg/L钾标准溶液调整零点,于波长766.5nm处测定钾标准系列溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标,钾标准系列溶液的浓度为横坐标,绘制工作曲线或计算回归方程。

3.2测定 

吸取5.0mL~20.O mL试液(C.4)于50mL容量瓶中,加10mL硝酸溶液、2.0mL氯化钠溶液,用水定容至刻度,摇匀。将此溶液吸人原子化系统中,用试剂空白溶液调整零点,于波长766.5nm处测吸光度,在工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中钾的含量。 

按上述步骤同时测定试剂空白消化液中钾的含量。 

4 计算 

X₁----样品中钾的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); 

C₁----从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中钾的含量,单位为毫克每升(mg/L); C01----从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试剂空白消化液中钾的含量,单位为毫克每升 

M_I-----样品的质量,单位为克(g); 

V₁-----测定时吸取试液的体积,单位为毫升(mL)。  

方法二：总磷的测定 

1、方法原理 

样品经消化后,在酸性条件下,磷酸盐与钒一钼酸铵反应呈现黄色,在波长400nm处测定溶液的吸光度,与标准系列溶液比较,确定样品中总磷的含量。 

2、试剂 硝酸 硫酸 

体积分数为10%的硫酸溶液:量取1体积硫酸(D。2.2),缓慢注人9体积水中。 

钒一钼酸溶液:称取⒛ ,0g钼酸铵,溶解在约亻00mL50℃ 热水中,冷却。称取1.0g偏钒酸铵, 溶解在300mL50℃ 热水中,冷却,边搅拌,边加入1mI'硫酸(D.2.2)。将钼酸铵溶液缓慢加到偏钒酸铵溶液中,搅拌均匀后转移到1000mL容量瓶中,用水定容至刻度。 

磷标准溶液:称取0.439厶g经105℃ ± 2℃ 烘烤2h的磷酸二氢钾,精确至0.0001g。置于50mL烧杯 

3、分析步骤 

3.1工作曲线的绘制 

吸取0.00mL、1.00mL、2,00mL、3.00mL、4.00mL、5.0OmL磷标准溶液,分别置于50mL容量瓶中,加10mL硫酸溶液,摇匀,加10mL钒一钼酸溶液,用水定容至刻度,摇匀,配制成0.Omg/L、2.0mg/I、4. 0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L、10.0mg/L磷标准系列溶液。在室温下放置10min。用1cm比色皿,以0.0mg/L磷标准溶液调整零点,在波长400nm处测定磷标准系列溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标,磷的含量为横坐标,绘制工作曲线或计算回归方程。 

3.2测定 

吸取5.0mL~10.0mL试液于50mL容量瓶中,加硫酸溶液补足至10mL,以下步骤按D.5.1操作。以试剂空白溶液调整零点,在波长在00nm处测定吸光度。从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中磷的含量,同时测定试剂空白消化液中磷的含量。 

4、计算

 X₂---样品中总磷的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); 

C₂---从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中磷的含量,单位为毫克每升(mg/L); C02---从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试剂空白消化液中磷的含量,单位为毫克每升(mg/L) 

M₂---样品的质量,单位为克(g); 

V₂---测定时吸取试液的体积,单位为毫升(mL)。  

方法三：脯氨酸的测定 

1、方法原理 

脯氨酸与水合茚三酮作用,生成黄红色络合物。用乙酸丁酯萃取后的络合物,在波长509nm处测定吸光度,与标准系列溶液比较,确定样品中L-脯氨酸的含量。 

2、试剂 乙酸丁酯 甲酸 

无过氧化物乙二醇独甲醚:将数粒锌粒放人乙工醇独甲醚中,在避光暗处放置2d。 3.0%茚工酮乙二醇独甲醚溶液:称取3.0g水合茚三酮,溶解在100mL无过氧化物的乙二醇 独甲醚溶液中,贮存在棕色瓶内,置避光处。此溶液易被氧化,应每周制备一次。 

试液的制备:称取一定量混合均匀的样品(浓缩汁1.00g;果汁5.00g;果汁饮料、水果饮料和果汁型碳酸饮料10.00g~200.0g)于200mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,备用。 

3、分析步骤 

3.1 工作曲线的绘制 

吸取0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、4.00mL、5.00mL脯氨酸贮备溶液于50mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,配制成0.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、25.0mg/L、40.Omg/L、50.0mg/L的L-脯氨酸标准系列溶液。 

吸取上述标准系列溶液各1.0mL,分别置于6支25mI'具塞试管(E.3.2)中,各加1mI'甲酸,充分摇匀,加2mL茚三酮乙工醇独甲醚溶液,摇匀。将6支试管同时置于1000mL烧杯的沸水浴中(电炉与烧杯问应垫石棉网,水浴液面应高于试管液而)。待烧杯中的水沸腾后,精确计 时15min,同时取出6支试管,置干20℃ ~22℃水浴中冷却10min。 

3.2 萃取、测定吸光度 

在上述6支试管中各加10.O mL乙酸丁酯,盖塞,充分摇匀,使黄红色络合物萃取到乙酸丁酯液层中。静置数分钟,将试管中的乙酸丁酯溶液分别倒入10mL具塞离心管中,盖塞。以2500r/min转速,离心5min。 

将上层清液小心倒人1cm比色皿中,以试剂空白溶液调整零点,在波长509nm处测定各上层清液的吸光度。以吸光度为纵坐标,⒈ 脯氨酸的浓度为横坐标,绘制工作曲线或计算回归方程。 

3.3试液的测定 

吸取1.O mL试液于25mL具塞试管屮,以下步骤按3.1操作。从工作曲线上查出(或用回归方程计算出)试液中L脯氨酸的含量。 

4 计算 

X₃---样品中⒈脯氨酸的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); 

C₃---从工作曲线上查出(或用回归方程汁算出)试液中L脯氨酸的含量,单位为毫克每升(mg/L) 

M₃---样品的质量,单位为克(g)。  

★所需仪器