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核酸杂交小帮手-Biodyne尼龙膜的选择及应用
发布:Cytiva(思拓凡)浏览次数:30可提供用于生物分子检测的诊断尼龙膜Biodyne nylon 6,6,灵敏度高、本底低并具有高度的批间一致性,天然亲水,易于润湿。当用于多次的杂交,洗脱和重新杂交时,Biodyne尼龙膜仍能保持较高的稳定性,不会发生皱缩,开裂或撕裂。此外,Biodyne尼龙膜能达到严格的分子生物学应用的标准,如法医学检测,可广泛应用于核酸杂交,共价配体固定化以及斑点杂交等各种核酸应用。
Biodyne尼龙膜,不同化学表面,适配不同应用实验
根据不同的实验应用方向,Biodyne尼龙膜可提供五种经γ射线灭菌的不同化学表面。
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Biodyne A膜是一种不带电的尼龙6,6膜。它具有对生物分子高结合容量,提供高度敏感的核酸的截留。特别适用于化学发光检测系统或者存在本底问题的系统,如核酸印迹,基因探针检测,DNA指纹识别。
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Biodyne B膜的多孔表面分布着高密度的四铵基基团,带有正电。Biodyne B膜在核酸检测应用中具有高灵敏,这种膜的结合机制是通过静电相互作用,并且可以在较宽的pH (3-10) 范围内保持核酸的离子结合力,从而能实现快速核酸转移等相关应用。除此之外,这一强的结合力使膜适合于长时间的转移过程,且无核酸从膜上扩散的风险。Biodyne B膜适于高敏感的检测,如核酸印迹、DNA指纹识别和菌落/菌斑转移。
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Biodyne Plus膜类似Biodyne B膜,是具有高等电点的带正电荷的尼龙6,6,也含有分布有高密度的四级铵基基团的多孔表面。这种膜具有极高的等电点,在某些非放射性检测实验中拥有比Biodyne A更高的灵敏度,同时相较于Biodyne B膜而言本底更低,适用于核酸印迹和DNA指纹分析。
4
Biodyne C膜是一种带负电的具有分布有高密度羧基基团的多孔表面的膜。这种膜的结合机制是通过静电相互作用,应用范围包括蛋白固定,ELISA,亲和纯化,反向点杂交。
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Immunodyne ABC膜是改性的尼龙膜,这种膜通过专利化学方法进行表面改性,可实现共价结合和稳定的配体固定。膜经过预活化,可与蛋白质和其他生物大分子上的亲核基团形成共价键。在中性pH值下,主要与胺基团发生反应。Immunodyne ABC膜本身具有亲水性,在与低离子强度的水溶液接触时可立即润湿,无需使用表面改性润湿剂,与配体溶液接触前无需预湿。与传统的无孔固相表面相比,这种膜具有更强的蛋白质结合能力。
Biodyne nylon 6,6实验性能测试
带正电尼龙6,6膜上检测到32P标记的基因组条带。
图1:用甲基化酶稀释液消化人DNA,凝胶的每条泳道内分别加入500至25 ng样品进行电泳,后转移到带正电的尼龙膜上 (Biodyne B) ,根据FBI推荐,将膜与32P标记的D1S7探针进行杂交,24 h的放射显影谱显示,可检测到低至25 ng的总DNA。
带正电尼龙6,6膜可经多轮转移和探针检测。
图2:Lambda-Hind III片段经凝胶电泳分离后转移到带正电尼龙 (Biodyne B) 膜上,条带完全被剥离后,用探针标记检测,重复4次,信号强度均未见损失。条带由化学发光检测系统检测。1A-4A:探针标记后的印迹;1B-4B:条带被剥离后,探针标记前的印迹。
化学荧光检测到带正电(高等电点)尼龙膜上的斑点杂交。
用Matrix Platemate robot将Lambda Hind III DNA点阵于Biodyne Plus膜上,每个斑点20 nL,每个浓度点阵2列。膜与DIG标记的Lambda DNA进行杂交,用碱性磷酸酶标记的抗DIG抗体进行检测,化学荧光底物加入后30 min,用Storm扫描膜显色结果。
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2024-04-07相关仪器 -
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