His标签蛋白纯化工具-His-Tag亲和层析填料

NTA，IDA，IMCA形式的His标签纯化填料或者预装柱产品，GX纯化His标签融合蛋白

His-Tag亲和层析填料

His-Tag可与多种金属离子发生特殊的相互作用，如Ca2+、Mg2+、Ni2+、Cu2+，Fe3+等，其原理是利用蛋白质表面的特性，使之被吸附在凝胶柱上，从而达到分离纯化蛋白的目的。

Ni2+在亲和纯化实验中的使用Z为广泛。根据结合基团的不同，Ni2+亲和层析柱可分为俩类——Ni-IDA和Ni-NTA。Ni2+有六个螯合价位，其中Ni-IDA螯合了三价，Ni-NTA螯合了四价。所以IDA的载量要比NTA的高，在同样条件下Ni-IDA洗脱时的咪唑浓度也高于Ni-NTA。但其弱的结合力使金属离子在洗脱阶段时很容易浸出，与目的蛋白紧密结合，从而导致分离蛋白产量偏低，产品不纯及金属离子污染等问题。而NTA的颗粒粒度均匀，粒径更小，并且螯合镍更稳定，能耐受较高的还原剂，使填料更加稳定，镍离子不易脱落。

His-tag作为蛋白纯化时的标签，其优势在于：

1. N-端的His-Tag与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；

2. 采用IMAC（固定化金属离子亲合层析）纯化His-Tag融合蛋白操作更加简便；

3. His-Tag对目的蛋白本身特性几乎没有影响，不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能；

4. His-Tag非常小，在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响；His-Tag的免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体；

与其它亲和标签构建成双亲和标签，并可应用于多种表达系统；

His-Tag融合蛋白的适用范围也较广，既可以在非离子型表面活性剂存在的条件下纯化，也可以在变性条件下进行纯化。前者通常用来纯化疏水性强的目的蛋白，而后者则通常纯化包涵体蛋白。

IMAC在通常的情况下是比较稳定的，但螯合剂的存在则会导致其金属离子脱落。例如在E.coli的裂解液中普遍存在一些非特异的弱螯合剂，如在三羧酸循环中产生了二羧酸类物质。因此，E.coli在某些高压情况下就会产生高特异性的金属螯合剂（通常存在于细菌的细胞周质中），导致His-Tag融合蛋白纯化的纯度和产量大大降低。所以在进行纯化His-Tag融合蛋白的实验时，首先需要去除螯合剂。

PurKine™ His-Tag 纯化系统基于创新的高载量IMAC基质，确保一步操作即可从总裂解液中GX纯化出His-Tag蛋白。 我们ZL的金属离子螯合方案使其可兼容：还原剂（如 DTT）、螯合金属蛋白酶YZ剂（如EDTA）和大部分缓冲液底物和盐环境。 PurKine产品线具有多种形式如：自由组合：螯合基团 (IDA，NTA or Super NTA)，交联介质 (4% 或 6% 交联的琼脂糖凝胶，磁珠）,和金属离子 (Ni，Co,Cu,无金属IMAC) ，ZL的的组装螯合配方，保证了His标签蛋白质的Zda产量，稳定性以及可溶性。

Fig. 1. His标签重组蛋白纯 化结果。PurKine™ His-Tag Ni-NTA Resin 4FF (Lane B)

；其它品牌的对应的纯化产品 (Lane C) 

PurKine™ His-Tag的纯化填料也可以以预装柱和试剂盒的形式提供，使用更加便捷。此外，还有琼脂糖凝胶树脂填料和磁珠形式。

PurKine™ His-Tag Ni-Super Resin 是 Ni-NTA Resin 的zhuo越替代品，比起NTA，Ni-Super 与 Ni 有更紧致结合构象，螯合更加稳定，能更高限度的兼容各类化学物质，比如还原剂、螯合剂。PurKine? His-Tag Ni-Super Resin特别适用于含有 会引起Ni离子脱落介质的样品中的His-Tag蛋白的纯化，比如含有螯合剂的分泌蛋白样品溶液。此外，它还具有高流速的特 性，适合用于蛋白质的大规模纯化。

Fig.2. PurKine? His-Tag Ni-Super Resin能够兼容多种的化学物 质：0.01M HCl (Lane C) ，0.01M NaCl (Lane D)

Fig.3. PurKine? His-Tag Ni-Super Resin能够兼容多种的化学物 质： 6M Gua-HCl (Lane D)，1M NaCl (Lane E)