食品中乙二胺四乙酸二钠盐的固相萃取方法(Copure®MAX)

一、实验目的 

本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测食品中乙二胺四乙酸盐的含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。

二、实验目标物   

乙二胺四乙酸二钠盐。

三、应用范围

本方法适用于蜜饯（蜜枣）中乙二胺四乙酸二钠盐的HPLC检测及确证。

四、实验材料  

biocomma®Copure®MAX 固相萃取柱 60 mg/3 mL。

五、实验方法

1、样品提取

准确称取蜜枣5 g，加入25 mL水，震荡、涡旋2 min，超声20 min，再于4000 r/min离心5 min。将离心后上清液置于另一50 mL离心管中；向蜜枣中再加入25 mL水重复提取一次；合并两次提取液，定容至50 mL，待净化。

2、SPE净化

(1）活化：MAX固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL 水活化；

(2）上样和洗脱：往固相萃取柱中加入5mL待净化液，弃去流出液；加入5 mL 5 %甲醇水溶液淋洗，弃去淋洗液；再加入5 mL甲酸-甲醇-水溶液进行洗脱（甲酸：甲醇：水=5：20：75；v/v/v），收集洗脱液;

注：整个上样淋洗洗脱过程中流速保持<1 mL/ min

3、络合、上机测试

洗脱液加入0.5 mL三氯化铁溶液，定容至5 mL，涡旋2 min，超声20 min；过滤供HPLC测试。

4、HPLC条件 

设   备：Waters Alliance 2690

色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)

检测器 ：Waters 2487 紫外检测器

等度洗脱 ：A：甲醇   B：四丁基溴化铵-乙酸钠（PH：4.0）= 15：85（v/v）

流速：1.0 mL/min

检测波长：254nm

进样体积: 20 μL

六、实验结果

1、1.0 mg/kg蜜枣基质中乙二胺四乙酸二钠的添加回收结果

表1  1.0 mg/kg蜜枣基质中乙二胺四乙酸二钠的添加回收结果

2、1.0 mg/kg 乙二胺四乙酸二钠标准液相色谱图

图1  1.0 mg/kg乙二胺四乙酸二钠标准液相色谱图

本方法回收率和RSD满足标准要求。