多元化检测技术助力液体活检ctDNA临床应用

传统的组织活检，因其局限性，如肿瘤的异质性、肿瘤患者无法进行手术、某些肿瘤解剖位置不便进行穿刺及穿刺自身的临床风险等，可能导致患者无法获得针对性治疗；液体活检(Liquidbiopsy)作为组织活检的补充，通过非侵入性取样降低活检危害，在动态监测肿瘤进展和治疗反应等领域获得临床认可，已成为肿瘤精准医疗领域炙手可热的明星技术。上个月底美国医疗保险机构Palmetto宣布将体细胞变异ctDNA分析测试纳入其保险范围，可见液体活检（ctDNA检测）的临床价值已获得医保机构的认可，并有望在临床推广。　　　　

液体活检的检测对象主要有CTC、ctDNA、循环microRNA和Exsome（外泌体），其中，ctDNA可应用于肿瘤的早期诊断、动态监测肿瘤的发生发展及疗效、耐药检测、复发风险评估等，在肿瘤诊治中前景广阔，受到越来越多的关注。　　　　

ctDNA是由肿瘤细胞释放到血浆中的单链或者双链DNA，携带有与原发肿瘤组织相一致的分子遗传学改变。是一种特征性的肿瘤生物标记物，并且可以被定性、定量和追踪。但由于ctDNA含量低（<1.0%总cfDNA），片段短（180-200bp），半衰期短（~2小时），故其检测对痕量核酸检测技术提出全新的挑战。
液体活检能否真正落实到临床应用，有赖于检测技术的临床普及。目前具备极微量核酸基因突变检测能力的技术主要有ARMS技术（包括Super-ARMS）、第二代测序（NGS）和数字PCR（ddPCR，包括BEAMing技术），这些技术也是近期液体活检专家共识中推荐的检测技术。　　　　

ARMS技术是目前欧盟及中国CFDA批准用于临床的血液检测方法，更是血液EGFR突变检测专家共识推荐的技术。ARMS技术具有简便快速，特异性好，技术普及度高等特点，非常适合医院广泛开展。作为肿瘤液体活检临床上唯一获得法规支持的检测技术，EGFR突变血液检测产品（采用ADx-ARMS法）已广泛应用于临床诊断，让越来越多的患者受益。同时，ARMS技术自身也在不断升级改造，Super-ARMS是ARMS技术的升级版，敏感度进一步提高。随着相关检测试剂盒的开发和产业化，未来有望成为普及性的临床血液检测方法。　　　　

NGS技术可检测未知突变且检测基因数量不受限，在检测灵敏度方面亦有潜力可以挖掘，在肿瘤耐药突变的监测与研究等领域有很大的应用潜力。然而，NGS建库技术复杂，常规建库测序方法使得血浆中含量极低的肿瘤信号完全淹没在背景噪声中，建库过程原始信息丢失严重或成为敏感度潜力发挥的限制因素。同时，由于NGS技术专业要求高、检测流程及信息解读标准化、检测时间过长、费用过高等限制了其临床应用。因此，NGS技术要实现在液体活检中的临床应用，还有许多问题亟待解决。　　　　

数字PCR技术，具有极高的敏感性，可绝对定量；但该方法检测通量较低，且不能检测融合变异，目前应用此技术进行ctDNA检测的试剂盒尚待开发中。值得一提的是，作为检测已知基因变异位点的检测技术，数字PCR技术与Super-ARMS技术具有高度的检测一致性，且检测灵敏度相当，从临床普及性上来看，Super-ARMS更适合于临床应用推广。

液体活检还处于行业发展的早期，还有一些问题亟待解决，如提高检测技术的灵敏度和特异性、血液采集系统和分析步骤等的标准化等。液体活检已获得临床医生的广泛认可，新的技术、方法和应用都在快速涌现。随着未来越来越多ctDNA检测技术的介入，检测的终端价格有望降低，这将有利于液体活检的临床推广，加速肿瘤精准医疗的医学革命进程，惠及更多患者。