简析正相色谱与反相色谱的区别

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

在GX液相色谱分析中，根据流动相和固定相相对极性的不同，可分为正相色谱和反相色谱所谓正相色谱是指固定相极性大于流动相极性的情况，反之，固定相的极性小于流动相的极性，则称为反相色谱 正相色谱与反相色谱的区别是社么呢？由于极性化合物更容易被极性固定相所保留，所以正相色谱系统一般适用于分离极性化合物，极性小的组分先流出相反，反相色谱系统一般适用于分离非极性或弱极性化合物，极性大的组分先流出因此在应用上，正相色谱用于分离极性较大的物质，如蛋白质生物碱等反相色谱多用于分离极性较小的物质，在流动相的选择上，反相色谱的优势更大，在实际工作中反相色谱的应用更为广泛 正相色谱用的固定相通常为硅胶，以及其他具有极性官能团，如胺基团和氰基团的键合相填料由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份Zxian被冲洗出色谱柱 反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相反相谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合Zxian被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留常用的反相填料有C18C8C4C6H5等 反相液相色谱柱效高分离能力强保留机理清楚，是液相色谱分离模式中使用Z为广泛的一种，对于生物大分子蛋白质及酶的分离分析，反相液相色谱正受到越来越多的关注．反相色谱法是以表面非极性载体为固定相，以比固定相极性强的溶剂为流动相的一种液相色谱分离模式．反相色谱固定相大多是硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离．在生物大分子分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液，添加一定量乙腈异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动相．普通的反相色谱固定相和孔径大于300Å的硅胶键合烷基固定相应用较为普遍，聚合物基质的反相色谱固定相也有较多应用． 在分析实验中需将反相色谱切换正相色谱的方法如下： 1先将色谱柱用相应的溶剂冲洗干净，然后将色谱柱拆下来密封保存用双通将进样器与检测器连接； 2将贮液瓶内装入300ml的二次蒸馏水，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1.5h注意观察泵压； 3将流速渐次降到0ml/min，把二次蒸馏水更换为甲醇，，将流速渐次提高到2.0ml/min冲洗系统1h； 4用同样的方法将甲醇更换为异丙醇四氢呋喃，各冲系统1h； 5Z后将四氢呋喃更换为预先配制好的流动相冲系统1h，同时将柱塞杆清洗系统内的10%异丙醇更换为流动相，保持50-60滴/min的速度清洗柱塞杆再将双通更换为正相色谱柱，待色谱柱平衡好以后就可分析样品了 本文地址：www.hxsj17.com