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PCR反应污染的处理方法

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概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单
一环境污染源处理:
(1)稀酸处理法:对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡,使残余DNA脱嘌呤
(2)紫外照射法: 254/300nm波长紫外线照射30分钟适用于500bp以上长片段核酸
二反应液污染源处理:
(1)DNase I法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室温反应30 min后加热灭活,然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列
(2)内切酶法:选择识别4个碱基的内切酶(如Msp I和Taq I等),可同时选择几种,以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷,室温作用1h 后加热灭活进行PCR
(3)紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射,适用于500bp以上长片段核酸 PCR基因扩增仪|荧光定量基因扩增仪|梯度PCR基因扩增仪
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