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旋涡混合器提取质粒DNA

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从大肠杆茵中提取质粒DNA的方法很多,其中的碱性别方法提取质粒是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异而予以分离的在强碱性条件下,染色体洲A和质粒DNA均变性(双链解开)由于质粒DNA是共价闭合环状超螺旋结构,变性后两条互补链不会完全分开当溶液pH调节到中性时.质粒DNA容易复性并溶解在溶液中,而染色体DNA不容易复性,互相继绕.在利用台式高速离心机进行离心时极易和蛋白质3Ds复合物等一起沉淀下来转移出上演液,再用乙醇沉淀出其中的质粒DNA具体操作步骤如下:

(1)接种一单菌落于100ml LB液体培养基中,加入50l的氨芐青霉素,37振荡培养810h,使培养达到饱和状态
(2)取1.5ml培养液利用台式高速离心机离心20s,沉淀用100l GTE悬浮并于室温放置5min
(3)加入200l NaOH/SDS溶液,混匀,于冰上放置5min
(4)加入150l KAc溶液,在MixMax旋涡混合器上振荡2s,于冰上放置5min
(5)离心3min,然后吸取0.4ml上清液移入干净的微量离心管中,加入0.8ml无水乙醇,室温静置2min
(6)室温下通过台式高速离心机进行离心3min,(使用台式高速离心机时一定要注意转速时间控制以及操作规范)用lml 70%的乙醇洗涤沉淀,然后真空于燥
(7)沉淀用30l dd HO溶解,-20保存
文章链接:开源国创仪器网 http://www.keyyer.com/ 美国SI Vortex Genie2 涡旋振荡器|SI旋涡混合器|旋涡混合器
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