茶叶中草甘膦及其代谢物的测定 SPE-UPLC-MS/MS法-ProElut GLY+Polyamino HILIC

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

方法：

SPE-HPLC法

基质：

茶叶

应用编号：

102444

化合物：

草甘膦及其代谢物

固定相：

——

SPE柱：

——

色谱柱：

Dikma Polyamino HILIC 150 x 2.0 mm, 5 μm

样品前处理：

1、标准品配制

单标标准储备液：准确称取各标准品，用水配制成1000 ug/mL的单标标准储备液。

混标标准中间液：分别吸取各单标标准储备液，用水配制成1.0 ug/mL、10 ug/mL和50 ug/mL的混标标准中间液。

2、提取

取1 g茶叶于50 mL离心管中，准确加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振荡10 min，超声10 min，8000 rpm离心5 min，取5 mL上清液，待净化。

3、净化

ProElut GLY 6mL (Cat#:65938）

(1)活    化：

依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；

(2)上    样：

将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 um尼龙滤膜，上机分析。

注：同方法制备基质匹配标准溶液。

色谱条件：

1 UPLC 条件：

色谱柱：Polyamino HILIC，150×2.0 mm，5 μm (Cat#：99302)

流速：0.2 mL/min     进样量：10 μL      柱温：35 ℃

流动相： A：乙腈   B：5 mM乙酸铵溶液，氨水调节至pH=11

梯度设置：

Time（min）

0

2

2.1

8

8.1

15

A（%）

80

80

20

20

80

80

B（%）

20

20

80

80

20

20

2.质谱条件：

电离模式：ESI            扫描方式：负离子扫描

检测方式：多反应监测     电喷雾电压：-4500 V

雾化气压力：60 psi       辅助气压力：60 psi

气帘气压力：35 psi       离子源温度：550 ℃

定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表

目标化合物

定性离子对

（m/z）

(母离子/子离子)

定量离子对

（m/z）

(母离子/子离子)

碰撞气能量/eV

去簇电压/V

氨甲基膦酸

109.9/62.8

109.9/62.8

-23

-53

109.9/78.9

-35

-51

草甘膦

167.8/62.8

167.8/62.8

-30

-50

167.8/81.0

-21

-31

文章出处：

天津应用实验室

关键字：

茶叶、草甘膦、 SPE-UPLC-MS/MS法、ProElut GLY、Polyamino HILIC

摘要：

草甘膦（Glyphosate，Gly）是广泛使用的一类广谱非选择性除草剂，以其GX、廉价等特性被运用于各个农业和非农业领域。其在环境和生物体中富集并通过食品进入人体，会对人体健康造成危害。随着其在茶叶上的广泛使用，草甘膦及其主要代谢产物氨甲基膦酸残留问题也越来越受关注。目前常用的检测方法为离子交换净化、七氟丁醇（HFB）和三氟乙酸酐（TFAA）衍生后GC-MS检测，或9－芴基甲基衍生后LC-MS/MS检测，这些方法通常存在操作时间长、需要衍生等问题，因此建立一种简便、快捷、有效的草甘膦及其代谢物残留的检测方法具有重要的意义。

迪马科技在参考各种标准及文献的基础上，建立了SPE-UPLC-MS/MS法测定茶叶中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的检测方法，采用水提取， ProElut GLY固相萃取专用柱净化样品，收集流出液，Polyamino HILIC色谱柱分离检测。方法定量限0.1mg/kg。该方法特点：1）前处理步骤少，提取液直接通过净化柱接收流出液即可；2）有机溶剂消耗量小，前处理过程中也无需使用酸碱试剂；3）仪器分析简单，样品无需衍生直接分析可提高结果稳定性及减少实验成本。本方法适用于绿茶、花茶、铁观音、红茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的检测。可供广大分析工作者参考。

图谱：

添加回收结果

茶叶中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS检测添加回收结果：

样品

基质

回收率（%）

添加水平：0.1 mg/kg

添加水平：1 mg/kg

添加水平：5 mg/kg

加标量：1.0 μg/mL，加100 μL

加标量：10 μg/mL，加100 μL

加标量：50 μg/mL，加100 μL

氨甲基膦酸

草甘膦

氨甲基膦酸

草甘膦

氨甲基膦酸

草甘膦

绿茶

103

91

99

109

92

101

花茶

95

105

109

85

93

99

铁观音

84

81

83

94

80

100

红茶

100

101

86

85

89

98

普洱茶

80

95

89

95

88

102

(1)活化：	依次加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液；
(2)上样：	将待净化液加入柱中，弃去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混匀，滤液过0.22 um尼龙滤膜，上机分析。

Time（min）	0	2	2.1	8	8.1	15
A（%）	80	80	20	20	80	80
B（%）	20	20	80	80	20	20

目标化合物	定性离子对（m/z） (母离子/子离子)	定量离子对（m/z） (母离子/子离子)	碰撞气能量/eV	去簇电压/V
氨甲基膦酸	109.9/62.8	109.9/62.8	-23	-53
氨甲基膦酸	109.9/78.9	109.9/62.8	-35	-51
草甘膦	167.8/62.8	167.8/62.8	-30	-50
草甘膦	167.8/81.0	167.8/62.8	-21	-31

样品基质	回收率（%）
	添加水平：0.1 mg/kg		添加水平：1 mg/kg		添加水平：5 mg/kg
	加标量：1.0 μg/mL，加100 μL		加标量：10 μg/mL，加100 μL		加标量：50 μg/mL，加100 μL
	氨甲基膦酸	草甘膦	氨甲基膦酸	草甘膦	氨甲基膦酸	草甘膦
绿茶	103	91	99	109	92	101
花茶	95	105	109	85	93	99
铁观音	84	81	83	94	80	100
红茶	100	101	86	85	89	98
普洱茶	80	95	89	95	88	102