一、样品提取
称取混匀蜂蜜试样 5.00 g( 精确到 0.01 g),置于 50 mL 离心 管中,用 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine 缓冲液溶解并定容至 50 mL,涡旋混合 1 min,冰水浴超声 10 min,转移至 50 mL 离心 管中,冷却至 0℃ -4℃,5000 r/min 离心 10 min( 温度低于 15℃ ),用滤纸过滤待净化。
二、SPE 柱净化(Copure® HLB,60 mg/3 mL)
活化:HLB 柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。
上样和洗脱:准确吸取 10 mL 备用液以 1 滴 / 秒的速度过 HLB 固相萃取柱,待样液全部流出后,依次用 5 mL 水和 5 mL 甲醇 - 水 (5:95, v/v) 淋洗,弃去全部流出液。2.0 kPa 以 下减压抽干 5 min,最后用 10 mL 甲醇 - 乙酸乙酯溶液 (1:9, v/v) 洗脱,收集洗脱液。
重新溶解:洗脱液于 40℃氮气吹干,加 10 mmol/L 三氟乙酸 水溶液 1.0 mL 溶解残余物,水系滤膜过滤,供高效液相色谱 测定。
三、仪器条件
设备:Waters Alliance 2695 色谱柱:XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器:Waters 2487 紫外检测器 检测波长:350 nm 流动相:A:乙腈 B:10 mmol/L 三氟乙酸水溶液 洗脱方式:梯度洗脱,见表 1
表 1 流动相梯度洗脱程序
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