一、样品提取
准确称取均质后的猪肉 3.0 g 于 50 mL 离心管中,加入 0.1 mol/L 的 EDTA-Mcllvaine 溶液 15 mL,漩涡摇匀 1 min,冰水浴 超声 10 min,控制样品温度 <15℃;5000 r/min 离心 8 min。取 上清液,重复提取一次,合并清液、快速滤纸过滤,备用。
二、SPE 柱净化(Copure® HLB,60 mg/3 mL)
活化:HLB 固相萃取柱使用前用 3 mL 甲醇、3 mL 水活化。
上样和洗脱:在 HLB 固相萃取柱上加入 10 mL 备用样液,弃 去流出液,用 3 mL 5%甲醇水溶液淋洗,弃去淋洗液,抽干小柱; 用 8 mL甲醇 -乙酸乙酯溶液(1:9, v/v)洗脱,收集洗脱液(整 个上样、洗脱过程保持流速 2 mL/min)。
重新溶解:洗脱液 40℃氮吹吹干,1 mL 甲醇定容,过 0.45 µm 滤膜,上机测试。
三、仪器条件
设 备:Waters Alliance 2695 色谱柱 :XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器 :Waters 2487 紫外检测器 检测波长:270 nm 流动相 :A:乙腈 B:0.1% 甲酸水溶液 洗脱方式:梯度洗脱,见表 1
表 1 流动相梯度洗脱条件
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