一、样品提取
准确称取饲料样品 2.0 g 于 50 mL 离心管中,加入 2% 氨水 溶液 21 mL,超声提取 10 min,振荡提取 10 min,准确加入 0.25 mol/L 的亚铁氰 化钾溶液 2 mL、1 mol/L 的乙酸锌溶液 2 mL,涡旋混匀。5000 r/min 离心 5 min,取上清液 5 mL 转 移至 25 mL 容量瓶中 , 用 2% 氨水溶液定容至 25 mL,备用。
二、SPE 柱净化(Copure® MAX,60 mg/3 mL)
活化:MAX 固相萃取柱使用前用 3 mL 甲醇、3 mL 水活化。
上样和洗脱:在 MAX 固相萃取柱上加入 5 mL 备用样品,弃去 流出液;用 3 mL 2% 氨水溶液(v/v)、3 mL 甲醇淋洗,弃去 淋洗液;抽干小柱;用 2 mL 5% 甲酸甲醇溶液洗脱,收集洗脱 液(整个上样、洗脱过程保持流速 1 mL/min)。
重新溶解:洗脱液过 0.45 µm 滤膜,上机测试。
三、仪器条件
设 备:Waters Alliance 2695 色谱柱:XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 µm) 检测器:Waters 2487 紫外检测器 检测波长:230 nm 流动相:A:乙腈 B:磷酸盐缓冲溶液(分别称取 2.5 g 磷酸 二氢钾和磷酸氢二钾,加水溶解定容到 1000 mL) 洗脱方式:等度洗脱,A: B=10: 90 流速:1.0 mL/min 进样体积:20 µL
四、实验结果
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