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Xevo TQ Absolute高效定量生物分析解决方案

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内容节点
概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单

作为分析仪器的领跑者,沃特世一直致力于质谱技术的创新和传承,为广大客户解决实验过程中的诸多难题。


Xevo TQ Absolute也不负期待,不仅性能上有了质的飞跃,同时也让用户的运营成本降低了50%,协助制药食品饮料以及环境分析实验室在开展的各类应用中充分满足痕量水平质谱定量分析的相关法规要求。


今天,就和大家分享Xevo TQ Absolute在生物分析领域的解决方案,一起来看看这款新产品如何以高灵敏度定量人和大鼠血浆中的华法林呋塞米


华法林是⼀种抗凝剂,用于治 疗和预防血栓栓塞。必须仔细、持续地监测华法林,确保药物浓度保持在范围较窄的治 疗血药浓度内。呋塞米是⼀种利尿剂,用于治 疗心力衰竭、肝病或肾病患者的水肿。本方案中,我们使用华法林和呋塞米作为代表性分子,在⼀家典型的发现生物分析实验室开展了研究。


实验部分

1样品前处理

用100 ng/mL的华法林呋塞米储备液加标大鼠和人血浆,建立0.025 - 100 ng/mL的校准曲线。使用单独储备液(100 ng/mL)生成LLOQ、LQC、MQC和HQC的QC样品。使用乙腈按1:3的比例进行蛋白沉淀,所有样品均提取100 μL,⼀式三份。将样品离心,上清液转移到LC-MS样品瓶以供分析。


2液相色谱条件

  • 液相色谱系统:ACQUITY Premier UPLC系统

  • 色谱柱:MaxPeak UPLC HSS T3 2.1 x 50 mm色谱柱

  • 柱温:60°C

  • 样品温度:5°C

  • 进样体积:1 μL

  • 流速:600 μL/min

  • 流动相A:含0.01%甲酸的100%水溶液

  • 流动相B:含0.01%甲酸的100%乙腈溶液

  • 梯度:在1.5 min内从5%增⾄95%


3质谱条件

  • 质谱系统:Xevo TQ Absolute

  • 电离模式:ESI-

  • 毛细管电压:0.5 kV

  • MRM通道:


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4结果

使用上述样品提取和LC-MS方法,我们能够使大鼠和人血浆中华法林的LLOQ达到25 pg/mL(图1)。


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图1. 从人和大鼠血浆中提取的华法林的LLOQ。


人和大鼠血浆中呋塞米的LLOQ均确定为100 pg/mL(图2)。


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图2. 从⼈和大鼠血浆中提取的呋塞米的LLOQ。


两种分析物的观测MS响应均呈线性增加,如校准曲线上各浓度样品的代表性色谱图所示(图3)。


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图3. 从人血浆中提取出的华法林和呋塞⽶在校准曲线上不同浓度点的代表性色谱图。


校准曲线QC上的所有点每天重复提取三次,各浓度水平上所有点的%CV均<12%(表1)。


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1. 从人血浆中提取华法林和呋塞米的日间准确度和精密度(3天,每天重复三次)。


结论

ACQUITY Premier系统采⽤了新型MaxPeak高性能表面(HPS)技术可有效降低因金属相互作用所导致的非特异性吸附损失,显著减少方法开发和样品分析时间,不再需要衍生化等复杂的样品前处理步骤,以及高级的色谱柱缓冲液流动相


Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪是⼀种新型的高性能串联四极杆质谱仪,其设计紧凑、拥有更强的负离子检测性能和可拆卸式离子源外壳,能减少样品基质和流动相缓冲盐带来的离子源污染。这些属性使常规、耐用且灵敏的检测器能发挥其理想性能,在正离子模式和负离子模式下均能提供优异的灵敏度,并尽可能为每周需要运行数百个样品的实验室减少停机清洗时间。

使用ACQUITY Premier UPLC系统和Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪定量从人和大鼠血浆中提取的华法林和呋塞米。能够实现:


  • 人和大鼠血浆中华法林呋塞米的LLOQ分别为25 pg/mL100 pg/mL

  • 校准曲线和各QC浓度上所有点的%CV均<12%,完全位于生物分析验收标准的允许范围内。


ACQUITY Premier UPLC系统Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪可提供优异的稳定性和灵敏度,且方法性能不受影响,因此是适用于发现生物分析实验室的理想平台。


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