GB 31658.5-2021前处理关键点和要点 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定

原理

试料中残留的氟苯尼考与氟苯尼考胺，用碱化的乙酸乙酯提取，正己烷除脂，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。

8.1 提取 称取试料2g（准确到±0.02g），于50 mL离心管中，加氘代氯霉素内标溶液100 μL，涡动混匀，静置15 min。加乙酸乙酯-氨水溶液10 mL，涡动1 min，3000 r/min离心5 min，取上清液于100 mL鸡心瓶中，残渣重复提取两次，合并3次提取液。鸡心瓶中加5%乙酸2 mL，振摇混匀，于40 ℃水浴中浓缩至1.5 mL。转至另50 mL离心管中，用5% 乙酸2 mL洗涤鸡心瓶，洗涤液转至同一离心管，加正己烷5 mL脱脂，涡动1 min，3000 r/min离心5 min弃上层，下层提取液重复脱脂一次，备用。

关键词：碱性条件下提取，提取3次

要点：

• 氟苯尼考及氟苯尼考胺，在碱性条件下，更加容易被有机溶剂提取，可以获得满意的提取回收率。

• 碱化的乙酸乙酯提取3次，浓缩后正己烷除脂。

关键词：5%乙酸

要点：

• 在蒸发前，在鸡心瓶中加5%乙酸。有助于保护氟苯尼考胺在操作过程（合并、浓缩）中的回收率。

8.2 净化 MCX 固相萃取柱依次用甲醇2 mL和水2 mL活化。备用液过柱，用5 %乙酸2 mL淋洗， 用10 %氨甲醇5 mL洗脱。收集洗脱液，于40 ℃氮气吹干。用30 %乙腈水溶液500 μL溶解残余物，滤膜过滤，供超高效液相色谱-串联质谱测定。

关键词：GB 31658.5-2021与GB/T 22959净化步骤区别

要点：

• GB/T 22959之前的氟苯尼考检测标准，净化采取的是液液萃取法。

• 对于样品基质比较复杂的情况，干扰物质较多，单纯的液液萃取和脱脂净化，不够理想的时候，使用SPE小柱将有更好净化效果，因此新标准GB 31658.5采取了MCX固相萃取净化。

关键词: 5 mL氨甲醇洗脱，氮吹

要点：

• Tips：色谱柱或保护柱前加溶剂效应消除器（PN：AN80C037，谱宁科技），对于氟苯尼考和氟苯尼考胺检测限和定量限比较高的药物，5 mL氨甲醇洗脱后，可不经过氮吹，过滤膜后直接进行分析，不但可以满足检测要求，而且可以提高效率和目标物回收率，同时可以避免出现溶剂效应问题。（标准中氮吹的过程，一方面是为了浓缩样品，另一方面是为了转换溶剂，减少分析中出现的溶剂效应问题）。

关键词：MCX固相萃取柱的特点和使用注意事项

要点：

• 标准中使用的MCX 60 mg/3 mL (PN:AN60A012，纳鸥科技），混合型强阳离子交换反相柱，提供了双重保留模式：强阳离子交换+反相。

• MCX小柱对于碱性化合物具有高的选择性，能够选择性保留阳离子化合物或者碱性化合物。

• 当目标化合物酸化后，呈现出阳离子特征，通过电荷和分子间力的结合，从而保留在MCX小柱上，随后可以通过改变离子强度、PH值破坏分子间作用力，把目标分析物洗脱下来。

• 所以前面提到的备用液是5%的乙酸，就是为了净化步骤上柱创造一个酸性条件。

• 氟苯尼考和氟苯尼考胺在酸性环境下表现为阳离子，上柱后就能保留在MCX小柱上。随后是用5%的乙酸淋洗，去除干扰物的同时，需要的分析物仍旧保留在小柱上。

• 洗脱时，洗脱液是10 %氨甲醇，这时目标分析物就不在表现为阳离子，从而洗脱下来，实现了净化效果。