如何清除体内新冠病毒？希望之城带来希望….

NK细胞又称自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)，在体内负责杀伤老化、受病毒感染、肿瘤等异常细胞的最主要“战士”。NK细胞无HLA限制，它不需要接受免疫系统的特殊指令，也不需要其他细胞的配合，自己单独就能识别和攻击异形细胞、肿瘤细胞和病毒感染的细胞。

因此，NK细胞是最有望实现现货型的细胞治 疗产品。近期，联合IL-15的靶向CD19的CAR-NK展现出良好的临床结果。另外，NK细胞是人体抵抗病毒感染的第 一道防线，在感染后可以快速响应并应对感染细胞的清除。

但是有研究表明新冠肺炎患者常表现为淋巴细胞数量下降，降低了免疫系统抵抗病毒的能力，而且内源性NK细胞缺乏对SARS-CoV-2病毒的特异性。SARS-CoV-2通过糖基化刺突蛋白（S）与宿主细胞膜表面ACE2结合从而进入宿主细胞。近年来对于SARS-CoV-2的研究多集中在靶向S蛋白的中和抗体，以期阻断SARS-CoV-2进入宿主细胞。

近期，来自美国希望之城国家医疗中心的科学家设计了靶向SARS-CoV-2的CAR-NK。科学家们从脐带血（UBC）中分离NK细胞，将包含有ACE2突变体和人可溶性IL-15的CAR装载到NK细胞上，并命名为mACE2-CAR_sIL15 NK细胞。

实验方案

研究者利用两种转录病毒载体来转导NK细胞，两种载体分别表达mACEA CAR和IL-15。并验证了mACE2-CAR_sIL15 NK细胞可以与S蛋白和重组病毒VSV-SARS-CoV-2结合。

mACE2-CAR_sIL15 NK细胞的构建

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RTCA长期毒性测定

为了进一步验证mACE2-CAR_sIL15 NK细胞是否真的可以清除受病毒感染的细胞，研究者在人肺癌细胞系A549上表达了S蛋白（A549-spike），经过安捷伦实时细胞分析仪（RTCA）的长期细胞毒性测定，发现mACE2-CAR_sIL15 NK细胞对A549-spike细胞的细胞毒性明显高于对照NK细胞。并且根据总结数据来看，不同效靶比（E/T ratio）下的mACE2-CAR_sIL15 NK细胞对A549-spike的细胞毒性都强于对照NK细胞。

利用Agilent xCELLigence RTCA验证了mACE2-CAR_sIL15 NK细胞对表达了spike蛋白的靶细胞的杀伤

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动物模型验证

随后研究者在体内试验中也进行了验证。在免疫缺陷NSG小鼠中接种A649-spike细胞，并输注mACE2-CAR_sIL15 NK细胞验证其是否可以有效的结合spike蛋白并对靶细胞进行杀伤。在K18-hACE2人源化小鼠模型中感染病毒后输注mACE2-CAR_sIL15 NK细胞，结果表明mACE2-CAR_sIL15 NK细胞可以有效阻止病毒体内的复制以及增加小鼠存活率。

动物模型中表明，在接受了mACE2-CAR_sIL15 NK细胞的小鼠死亡率以及病毒拷贝数显著降低

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细胞冻融

另外，为了评估mACE2-CAR_sIL15 NK细胞的潜在临床应用价值，研究者还对mACE2-CAR_sIL15 NK细胞冻融后的活力，CAR的表达和杀伤功能做了测试。发现细胞复苏后，超过80%的细胞功能恢复，细胞活力大于90%，即使是复苏后6h，细胞活力仍大于80%。

细胞冻融对mACE2-CAR_sIL15 NK细胞的活力和效力没有影响

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实验结论

总之，这篇文章阐述了一种新的免疫治 疗方法，对于没有其他有效治 疗方案的高风险 COVID-19 患者，这种冷冻的现货型同种异体CAR NK细胞疗法可能会立刻产生临床益处。而且，可以将这种mACE2-CAR_sIL15 NK细胞冷冻保存后储存在医疗中心，以便在感染SARS-CoV-2的高风险患者出现临床恶化的第 一 时间就可以立即解冻然后进行输注。

在这个研究中，安捷伦xCELLigence RTCA实时细胞分析仪在mACE2-CAR_sIL15 NK细胞对A549-spike细胞的细胞毒性进行了实时、长时程的测定，这种实时检测的体外系统能更好地帮助研究者预测体内药效，加速医药研发进程。