高性能制备色谱填料GEAgel的性能评价

内容节点: 概述; 实验/设备条件; 样品提取; 实验/操作方法; 实验结果/结论; 仪器/耗材清单

生物工程的Z终目的是研制有益于人类的产品，如作为改善人类生存质量的蛋白质或多肽类药物由于医药制品直接关系到人们的健康，痕量杂质可能会对身体造成极大的损害，因此通常对其纯度的要求极高在生物工程产品的下游处理过程中，色谱技术因其具有多种不同的分离机理，设备简单，在实际分离提纯过程中占有重要的地位HPLC球形多孔改性硅胶是制备色谱常用填料，其合成路线及工艺不同，得到的产品在表面积纯度孔径分布等方面的性能也会存在很大的差别我公司发展了一种高性能制备色谱填料的合成新工艺，并成功开发出GEAgel系列色谱填料，本文对GEAgel-SP填料的特性加以研究，说明其作为分离介质的特性
1．金属杂质含量评价
硅胶担体的纯度对许多极性化合物的分离也极为重要硅胶被FeAlNiZn等金属杂质污染后能与螯合溶质络合，引起不对称或拖尾峰，甚至组分不能被洗脱出硅胶晶格中的其他金属（尤其是铝）能使表面硅羟基活性增强，酸性增强因此，HPLC分离，尤其是碱性与强极性化合物需用高纯硅胶，严格控制硅胶填料中的金属杂质含量表1中给出了GEAgel-SP填料中金属离子含量的测定结果，图1中也对比了两种填料在实际分离螯合物2，2联吡啶的结果两者相比相比，在其它品牌的ODS填料上，2，2联吡啶被不可逆吸附在填料上，而在ODS-AP上却得到了很好的分离
表1 GEAgel金属含量的分析结果
金属 Al Ti Fe Zr
范围 <10 <10 <10 <10
SP-120-5-P(Lot或 A) <1.0 <1.0 <1.0 <1.0
SP-120-5-P(Lot或 B) <1.0 1.6 2.4 <1.0
SP-120-5-P(Lot或 C) 2.5 <1.0 1.9 <1.0
SP-120-10-P(Lot或D) 2.4 2.4 2.3 <1.0
SP-120-10-P(Lot或E) 1.1 <1.0 <1.0 <1.0
SP-120-10-P(Lot或F) 1.1 <1.0 <1.0 <1.0

图1 2，2联吡啶在不同分离介质上的分离结果对比
2．机械稳定性考察
在当今的HPLCSFC和SMB系统中，GX的细粒度填料应用越来越普遍为了获得**的分离效果，色谱柱必须在很高的压力下装填既要提高生产效率，又常需采用高流速洗脱，结果在系统中就会形成高的反压在动态轴向压缩柱（DAC即弹簧柱）中，填料颗粒承受的机械压力很大，因而填料是否具备极高的机械强度尤其重要机械强度不好的填料在反复压缩下很容易被压碎，形成细粉，堵塞柱头滤片而且在柱内产生不均衡的流速分布，降低柱效，Z终在系统中产生极高的压力，使色谱柱必须重新装填新的填料GEAgel表现出很强的机械强度和机械稳定性未使用过的和重复装柱的GEAgel粒度分析结果表明：重复填装5次，D50只改变1%图2中也给出了重复填充所引起的反压变化结果

图2 重复填充所引起的反压变化
硅胶：球形 120Å 10µm 超纯；柱子：弹簧柱（直径50mm）
柱床长度：23cm(硅胶200g)；流速：150ml/分钟；流动相：2-丙醇
活塞压力：10Mpa（=100bar）