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蛋白质分子量的测定:SEC-MALS 与传统校正法

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概述
实验/设备条件
样品提取
实验/操作方法
实验结果/结论
仪器/耗材清单
溶液中蛋白质的物理性质和行为取决于与蛋白质的纯化和构成及其

自身固有属性相关的多种因素 尺寸排阻色谱 (SEC) 是一种强大的工

具,常用于分析蛋白质的回收率分子量和聚集性
SEC 的工作原理涉及在样品流经多孔的惰性色谱柱基质时对样品进

行分离 较小的分子进入填料孔内,而较大的分子则被排除在外,因

此可更快速地通过色谱柱 结果是获得基于流体力学体积的分离,但

是人们通常要求得出分子量 以前,通过比较未知蛋白质与(已知分

子量的)标准球状蛋白质的洗脱时间估算分子量,我们把这一过程称为

传统校正法 通常使用诸如紫外 (UV) 等单一的浓度检测器完成上

述操作 然而,现在我们联合使用光散射检测器和浓度检测器(紫外

或折光率,RI),可不依赖保留时间测定蛋白质分子量 这一进步非

常有用,因为许多蛋白质不具有球状结构,使得它们测得的分子量不准

确 由于增加了更多检测器(如另一台浓度检测器)特性粘度 (IV)

和动态光散射 (DLS) 检测,可极大地增加单次 SEC 测定所获得的信息


Malvern SEC-MALS 20系统是一款 20 角度光散射设备,

能够不依赖于洗脱体积测定蛋白质分子量 在此应用说明中,一些蛋

白质使用 SEC 进行分离 使用多角光散射 (MALS) 或传统校正法测定

它们的分子量, 并讨论了这些结果的差异 马尔文科研级多检测器凝胶色谱系统Viscotek TDAmax 马尔文科研级多检测器凝胶色谱系统Viscotek 270max 马尔文凝胶渗透色谱系统Viscotek HT GPC/SEC 马尔文稀溶液粘度计Viscotek DSV
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