共聚焦显微镜的原理

激光共聚焦显微镜的工作原理 

1)用激光做光源

因为激光的单色性非常好，光源波束的 波长相同，从根本上消除了色差。采用点光源照射标本，在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点，该点被照射后发出的荧光被物镜收集，并沿原照射光路回送到由双向色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。

2)采用共聚焦技术

光源和探测器前方都各有一个针孔(照明针孔和探测针孔)。直径约100-200nm;相对于焦平面上的光点，两者是共轭的，即光点通过一系列的透镜，Z终同时聚焦于照明针孔和探测针孔。这样，来自焦平面的光，可以会聚在探测孔范围之内，而来自焦平面上方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。

3)采用点扫描技术

激光逐点扫描样品，探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光点的共聚焦图像，转为数字信号传输至计算机，Z终在屏幕上聚合成清晰的整个焦平面的共聚焦图像。

4)用计算机采集和处理光信号，并利用光电倍增管放大信号

在共聚焦显微镜中，计算机代替了人眼或照相机进行观察、摄像，得到的图像是数字化的，可以在电脑中进行处理，再一次提高图像的清晰度。而且利用了光电倍增管，可以将很微弱的信号放大，灵敏度大大提高。