实时荧光定量PCR仪进行绝对定量时，标准曲线线性不佳（R²<0.99）

学来学往 2026-07-14 15:45:02 32 浏览

使用qPCR仪进行绝对定量分析，用已知拷贝数的质粒DNA梯度稀释后制作标准曲线。每次实验，即使使用同一批试剂和耗材，标准曲线的R²值也经常在0.97-0.98之间徘徊，难以稳定达到0.99以上。这给样品拷贝数的精确定量带来了很大不确定性。

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实时荧光定量PCR仪进行绝对定量时，标准曲线线性不佳（R²<0.99）: 使用qPCR仪进行绝对定量分析，用已知拷贝数的质粒DNA梯度稀释后制作标准曲线。每次实验，即使使用同一批试剂和耗材，标准曲线的R²值也经常在0.97-0.98之间徘徊，难以稳定达到0.99以上。这给样品拷贝数的精确定量带来了很大不确定性。

原子吸收光谱仪标准曲线线性不佳，R²值低: 用耶拿ZEEnit 700P石墨炉法测血铅，按照药典方法配制标准系列，但做出的标准曲线线性很差，R²经常低于0.995。检查了灯电流、狭缝宽度和灰化/原子化温度，均按推荐值设置。怀疑是基体改进剂（磷酸二氢铵-硝酸镁溶液）的批次问题或石墨管寿命将至，影响了原子化效率。

qPCR标准曲线R²达不到0.99，不符合ISO15197要求: 做临床样本qPCR定量，按ISO15197要求做标准曲线，R²仅0.97，重复三次结果一致，已更换试剂引物，未找到问题。

原子吸收光谱仪（AAS）标准曲线线性差，重复性不佳: 按照GB方法测定水样中的重金属铅，配制系列标准溶液时，标准曲线的相关系数R²经常达不到0.995的要求，仅在0.98左右徘徊。同一浓度标准品连续测定多次，吸光度值漂移明显，RSD超过5%。已经检查了标准品配制过程、超纯水质量，并更换了空心阴极灯，问题依然存在。怀疑是雾化器效率或燃烧头位置问题，但不知

适用于实时荧光定量PCR仪QS7 八联管pcr板

适用于实时荧光定量PCR仪QS7 八联管pcr板本生生物供应：全系荧光定量PCR耗材，PCR管，进口PCR板，移液器吸嘴，离心管，进口冻存管，培养皿，培养板，培养瓶，吸头，仪器及手套，色谱耗材，针头过滤器等等。

八联管 96孔板

货号	品名	颜色	规格
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V1082-M	0.1ml PCR八联管	乳白色	120条/盒，10盒/箱
V2081-C	0.2ml PCR八联管	透明	120条/包，10盒/箱
V2081-M	0.2ml PCR八联管	乳白色	120条/盒，10盒/箱
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V2082-M	0.2ml PCR八联管	乳白色	120条/盒，10盒/箱
VP1011-C	无裙边96*0.1mlPCR板	透明	10块/盒，20盒/箱
VP1011-M	无裙边96*0.1mlPCR板	乳白色	10块/盒，20盒/箱
VP1021-C	半裙边96*0.1mlPCR板	透明	10块/盒，20盒/箱
V4801-M	半裙边96*0.1mlPCR板	乳白色	10块/盒，20盒/箱
V4802-M	半裙边96*0.1mlPCR板	乳白色	10块/盒，20盒/箱
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VP2001-C	无裙边96*0.2mlPCR板	透明	10块/盒，20盒/箱
VP2031-C	无裙边96*0.2ml凸PCR板	透明	10块/盒，20盒/箱
VP2011-C	半裙边96*0.2mlPCR板	透明	10块/盒，20盒/箱
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V4801-M	Roche 480专用PCR 96孔板	乳白色	10块/盒, 20盒/箱

适用于实时荧光定量PCR仪QS7 八联管pcr板

ABI7500,伯乐PCR仪专用8联排0.1/0.2,96孔板 ROCHE480荧光定量PCR仪专用96孔pcr板

适用仪器：

适用于罗氏Lightcycler480荧光定量PCR仪

用途:

广泛应用于遗传、生化、免疫、医药等领域，不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA，RNA的地方，属于实验室一次性易耗品。

实验相关耗材：

S-5009Tip 0.5-10ul进口加长吸嘴,无色, 带滤芯,盒装灭菌, 无DNA酶无RNA酶无热源

S-5103Tip 0.5-20ul进口加长吸嘴,无色, 带滤芯, 盒装灭菌,无DNA酶无RNA酶无热源

S-5105Tip 1-100ul进口加长吸嘴,无色, 带滤芯,盒装灭菌, 无DNA酶无RNA酶无热源

S-5106Tip 1-200ul进口加长吸嘴,无色, 带滤芯, 盒装灭菌,无DNA酶无RNA酶无热源

S-5107SRTip 100-1300ul进口加长吸嘴,无色, 带滤芯, 盒装灭菌,无DNA酶无RNA酶无热源

BS-1778人α-酮异戊酸脱氢酶(α-KAD)ELISA试剂盒

BS-1779人支链氨基酸脱氢酶(BCAAD)ELISA试剂盒

BS-1780人uroguanylin(UGN)ELISA试剂盒

BS-1781人串珠素(HSPG2)ELISA试剂盒

BS-1782人淀粉样蛋白A1(SAA1)ELISA试剂盒

BS-1783人白介素29(IL-29)ELISA试剂盒

BS-1784人甲壳质酶蛋白40(YKL-40)ELISA试剂盒

T-200-Y-R-S200ul盒装灭菌黄吸头 96个/10盒/5彩盒/箱

T-350-C-R-S300ul盒装灭菌吸头 96支/10*5盒/箱

T-1000-B-R-S1000ul盒装灭菌蓝吸头100个/10盒/5彩/箱

TGL-200RD-57-R200ul盒装圆嘴上样吸头 200支/2盒/箱

TR-222-C-L-R-S200ul盒装灭菌低吸附带刻度吸头96*10*5盒

23-0005-ST0.5ml冻存管，自立，外旋盖，底部带二维码

23-0015-ST1.5ml冻存管，自立，外旋盖，底部带二维码

0.1-10ul 带滤芯超微吸头,盒装,无色,无菌，96/铰链盒，10盒/包装,5包装/箱

20-200ul 带滤芯吸头,有刻度,盒装,无色透明,无菌,96/铰链盒，10盒/包装,5包装/箱

4306737MicroAmp™ Optical 96-Well Reaction Plate with Barcode

4309849MicroAmp™ Optical 384-Well Reaction Plate with Barcode

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产品优势：本生生物代理实验室耗材,PCR耗材品种全，可替代仪器原厂耗材，性价比高，质量稳定，对用户可以节省实验成本。

2021-10-11 14:42:00 613 0

实时荧光定量pcr仪属于YL器械管理吗:

实时荧光PCR仪导入标准曲线总报错，无法定量分析: 刚接触定量PCR，按SOP配置了梯度稀释的质粒标准品，导入软件后总弹出“浓度范围不匹配”报错，试了三次都不行，不清楚是样品处理还是软件设置出错。

原子吸收光谱仪标准曲线线性不好，R²值低: 用火焰法测铜元素，配制的标准曲线在低浓度点线性尚可，但高浓度点明显偏离，整体R²值只有0.995，达不到方法要求（>0.999）。灯能量和燃烧头位置都已优化过。

原子吸收光谱仪标准曲线线性不好，R值低: 用火焰原子吸收测铜元素，标准曲线（0, 0.5, 1, 2 ppm）的线性相关系数R只有0.992，达不到方法要求（R>0.999）。灯能量正常，燃烧头已清洗对光，标准溶液也是新配的。问题可能出在哪里？

原子吸收光谱仪标准曲线线性不好，R²值低: 用火焰原子吸收法测定土壤消解液中的铅和镉。按照标准方法配制系列标准溶液，但做出的标准曲线线性很差，R²值经常低于0.995。检查了灯能量、燃烧头位置和火焰条件，均显示正常，怀疑是基体干扰或标准品问题。

如何处理实时荧光定量PCR数据

实时荧光定量PCR数据中的基本概念：

在整个扩增过程中会出现基线期，指数期，线性期和平台期。其中在基线期和指数增长期，扩增产物都是以指数级增长，但是在基线期我们没办法检测；而到了线性期和平台期之后，由于不同基因，或者不同条件下其扩增效率差别很大，因此没有办法计算模板的含量。因此，在指数增长期的CT值就成了计算模板含量的关键值。

▲ 图一：线性图谱

▲ 图二：对数图谱

为什么知道CT值就能够得到最初的目标基因含量呢？

如图三，表示一个基因单次扩增曲线。N为扩增产物的分子数，模板的分子数乘以1+扩增效率的n次方，n代表循环次数。也就是说，如果扩增效率为100%，产物的分子数就等于模板数乘以2的n次方。但是在线性增长期和平台期，扩增效率不可能是100%，因此PCR理论方程只在指数期成立，也就是图三绿色框的部分。

▲ 图三

数据处理：

以下三张图分别表示我们在做荧光定量PCR时提到的三个名称：扩增曲线、标准曲线、溶解曲线。

1、juedui定量：使用一系列稀释的已知浓度的标准品与未知样本同时进行测定，根据系列浓度标准品的CT值与起始模板量之间的线性比例关系。

注意事项：

☑ 标准品必须来源可靠，浓度已知。

☑ 标准品要和待测样品同时在仪器中扩增。

☑ 只能根据标准品覆盖的浓度范围进行待测样本浓度的推测。

2、相对定量：是用来确定经过不同处理的样品之间的表达差异或目标在不同时相差的表达差异，也就是倍数差异。

Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统

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2022-06-06 14:14:13 445 0

原子吸收光谱仪标准曲线线性变差，R值不到0.995: 用火焰原子吸收法测定土壤消解液中的铜和锌。以往做标准曲线（0, 0.5, 1, 2, 5 mg/L）R²都能达到0.999，最近几次却只有0.992左右。重新配制了标准溶液，检查了燃烧头和雾化器，没有发现堵塞。灯电流和波长设置无误。请问，除了标准品和雾化系统，还有哪些因素会显著影响标准曲线的线性？比如光路准直、狭缝宽度或者检测器？