FPLC

FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography），其原理与GX液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。

近些年以来，在HPLC基础上发展出了新型色谱技术，包括低压液相色谱(LPLC)、中压液相色谱(MPLC)以及快速蛋白液相色谱(FPLC)，在这些新型色谱技术当中，快速蛋白液相色谱(FPLC)可以非常迅速地分离复杂混合物，能够在短时间内对大量样品加以纯化。其特性表现为较大的容量、较高的回收效率以及不易失活的生物大分子等。能够越来越广泛地使用于生命科学研究及药物生产上。

HPLC与FPLC的异同

FPLC与HPLC的相同点：

输液泵、高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和计算机控制等设备均为FPLC与HPLC所采用，快速、分辨率高、分离效能高等特点FPLC与HPLC也均具备。

FPLC与HPLC的不同点：

由耐高压的塑料管组成FPLC的管道系统，由柱塞式泵驱动流动相，中低压，使用内径较大的色谱柱，分析精度较高，0～100 mL/min(Z大流速可达1 000 mL/min)为流速范围，分析精度低于HPLC，仅使用常规无机盐溶液，对于大规模纯化样品非常适用。

HPLC的管道系统所采用的材料大都为金属，往复泵或隔膜泵一起驱动流动相，高压，使用内径较小的色谱柱，有较高的分析精度，流速Z大一般不高于20 mL/min(有些制备级HPLC能够达到300 mL/min)，有时一定浓度的有机溶剂需要被使用，对于微量样本检测或少量纯化制备君适用。

FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography），其原理与GX液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。

FPLC技术基本实验方案

实验原理

FPLC(fast protein liquid Chromatography)为一种特殊的GX液相层析(HPLC，high pressureliquid chromatography)装置，快速分离纯化和定量测定蛋白质组分是它的主要用途。他的本原理相同于HPLC，就是在高压条件下(20—200 kg/cm2)，通过在液相载体中分离物质的迁移速率的差异来进行分离纯化。

采用HPLC来对生物大分子分离纯化时，因为液相载体通常是有机溶剂，容易变性失活生物大分子，使得生物大分子的回收率降低。同时，采用非惰性的不锈钢来对HPLC系统的流通线路进行制造，金属离子工作状态下可能会发生解离，从而对某些蛋白质组分吸附。

FPLC的层析柱为耐高压的有机玻璃管，用耐高压的非金属材料制成其它管道，同时采用惰性液相载体，能够使蛋白组分安全快速地分离。所以FPLC对HPLC的操作简易、重复性强、分离速度快等特点加以保留，并且在生物大分子分离纯化过程中分辨率和实用性更加的高。FPLC有其专用预装柱，分子筛、离子交换、疏水层析等各类层析柱也配备了，广泛应用于生物学、化学和环境科学等领域。

实验用品

(一)器材

FPLC装置(Water公司)进样器。

(二)试剂

(1)洗脱缓冲液。

(2)20%乙醇。

(三)材料

若干待测蛋白质样品。

实验程序

1.对仪器连接情况进行检查，将电源开关打开

2.在控制台上对流速、纸速加以设计

3.经加样阀加样：在Injection位置放置阀杆，样品使用注射器加入。再扳阀杆至Load位置，样

FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography），其原理与GX液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。

快速蛋白液相色谱(FPLC)简介

FPLC为专门用来进行蛋白质、多肽及多核苷酸分离的系统，FPLC为近年来的一项重要革新，其除了对HPLC的快速、高分辨率等特性加以保持，并且其还具有柱容量大、回收效率高及不易使生物大分子失活等特性。所以近年来，其广泛应用于分离蛋白质、多肽及寡核苷酸等方面。伴随着HPLC的发展，有薄壳型填料和双扩散灌流型填料两种新型填料出现了，对于分离大分子物质，它们的优越性独特，从而大大拓展了FPLC的应用领域。其能够进行蛋白的含量的测定以及蛋白的分子量的确定，能够分离纯化蛋白、有机化合物，所以其在生物学领域和化学领域的研究可以得到使用。

近些年以来，在HPLC基础上发展出了新型色谱技术，包括低压液相色谱(LPLC)、中压液相色谱(MPLC)以及快速蛋白液相色谱(FPLC)，在这些新型色谱技术当中，快速蛋白液相色谱(FPLC)可以非常迅速地分离复杂混合物，能够在短时间内对大量样品加以纯化。其特性表现为较大的容量、较高的回收效率以及不易失活的生物大分子等。能够越来越广泛地使用于生命科学研究及药物生产上。

应用范围：

FPLC专门用于分离纯化蛋白质、多肽及多核苷酸。

HPLC能够对低沸点低相对分子质量分子、高沸点中分子、高分子有机化合物(包括极性、非极性)、离子型无机化合物、热不稳定生物分子加以分析。