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用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器,称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸,然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。

氨基酸分析仪
氨基酸分析仪的介绍和基本原理
氨基酸分析仪的介绍和基本原理

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器,称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸,然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离...[查看全部]

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氨基酸分析仪原理
氨基酸分析仪的介绍和基本原理

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器,称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸,然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。下面就让小编带你了解一下氨基酸分析仪的介绍和基本原理。

简介

和普通HPLC相比较,仪器有着相似的基本结构。然而针对氨基酸分析进行了如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等细节优化。

基本原理

氨基酸混合物在流动相(缓冲溶液)的推动下从装有阳离子交换树脂的色谱柱流经流经,各氨基酸与树脂中的交换基团交换离子。当洗脱时使用的pH缓冲溶液不同时,氨基酸混合物由于不同的交换能力而分离,分离出的单个氨基酸组分与茚三酮试剂发生反应,生成紫色化合物或黄色化合物,其在570nm、440rnn的吸光度用可见光检测器进行检测。这些有色产物对应的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸浓度之间的关系和朗伯-比尔定律相符合。以此为依据可以定性、定量分析氨基酸各组分氨基酸分析仪也可利用阴离子交换分离后经积分脉冲安培法检测。此检测方法不需要柱前或柱后衍生待测氨基酸。

系统

一般细分为蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统)两种系统。梯度洗脱利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂来进行。在这当中,钠盐系统每次分析的氨基酸至多能够达到大约25种。有比较快的速度以及比较好的基线平直度;锂盐系统每次分析的氨基酸至多能够达到大约50种,然而和钠盐系统相比,速度比较慢,也没有较好的基线平直度。

效果

相比较于目前已知的氨基酸分析方法,和HPLC柱前衍生方法相比较,除了灵敏度(Zdi检测限)稍低以外,在如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等其他方面,都比其他分析方法要好。

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氨基酸分析仪选购
氨基酸分析仪如何选购

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器,称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸,然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。下面就让小编带你了解一下氨基酸分析仪如何选购。

选购

1.仪器是否可靠

若仪器今天堵了、明天漏液,用户大量的人力财力将要付出,而且分析结果也没有什么可信度。

2.仪器的运行成本

比如柱子寿命是否可以以多少次进样计算、而不以多少年计算,国产试剂是否可以使用等。

3.仪器设计对于氨基酸分析是否有利

比如溶液和样品的制冷控制是否提供,在线脱气是否提供以及惰性气体保护(茚三酮极易被氧化)是否有。

4、原理

以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱法(IEC)。1958年Stein和Moore两人共同发明了此类方法,并于1972年获诺贝尔奖,为当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。

5、重要指标

如分离度、重复性等这些分析需要的技术指标均满足,并且当中的分离度指标更加的重要。因为色谱理论中两峰基本分离的判定前提通常是达到1.2的分离度。定性和定量的重复性的讨论只有当峰分开了才会有意义。

6、指标是否真实

一些厂家的全部数据用平均数据替代,只有如Asp或Arg等个别的氨基酸指标被标出等。但是如果厂家有比较高的经营信誉以及仪器有比较好的性能。为了方便用户参考,就会将全部氨基酸的指标标出。

7、售后服务

在分析过程中在所难免的事情是遭遇困难,厂家必须可以快速地对问题进行响应以及将问题尽快地解决。除此以外,一个重要因素是常用备件的价格,由于售后的问题在购买之前通常不会注意到,很多厂家的常用备件价格也没有公示,此在将来可能会遇到麻烦,事实上,一些看似微小的故障出现在很多仪器以后,由于需要比较高的维修成本,这些仪器就不再被使用。

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氨基酸分析仪操作
氨基酸分析仪的工作原理和操作方法

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器,称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸,然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。下面就让小编带你了解一下氨基酸分析仪的工作原理,操作方法以及指标信息。

这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度(或含量)之间的关系和比耳定律相符,能够和标准氨基酸比较作定性和定量测定。

工作原理

由于氨基酸组分的结构、酸碱性、极性及分子大小存在差异,能够从阳离子交换柱上分离出它们,通过对不同pH值离子浓度的缓冲液的利用依次洗脱下各氨基酸组分,再以另yi流路的茚三酮试剂逐个混合,之后共同往螺旋反应管中流入,在一定温度下(一般是115~120摄氏度)进行显色反应,从而使在在570nm有Z大吸收的蓝紫色产物形成。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物,440nm为Z大吸收。

操作方法

样品处理

对样品中各种游离氨基酸含量进行测定,能够将脂肪杂质除去,直接上柱进行分析。

必须先经过酸水解才能够对蛋白质的氨基酸组成进行测定,上柱分析之前,必须使蛋白质完全变成氨基酸。

样品分析

经过处理后的样品上柱进行分析。按照所用自动分析仪的灵敏度来确定上柱的样品量。通常是每种氨基酸大约0.1μmol(水解样品干重大约为0.3mg)。必须在pH5~5.5、100摄氏度下进行测定,10~15分钟为反应进行的时间。在570nm 波长下进行生成的紫色物质的比色测定。在440nm 波长下进行生成的黄色化合物的比色测定。一个氨基酸全分析通常仅要大约一个小时,可以同时往仪器中装入几十个样品,按照顺序自动分析,Z后数据会自动计算给出,非常精确。±1~3%为仪器的精度。

结果计算

各种氨基酸的定量结果可以通过带有数据处理机的仪器自动打印出来,不然,能够用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积

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氨基酸分析仪特点
氨基酸分析仪的定义,特点和故障解决

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器,称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸,然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。下面就让小编带你了解一下氨基酸分析仪的定义,特点和故障解决。

定义:

氨基酸分析仪专用于蛋白质水解液(水解氨基酸)及生理体液中(游离氨基酸)混合氨基酸含量的测定的一种仪器,其进入国内市场已有近三十年的历史,如今在各行各业均得到了非常广泛地应用。和其他的分析仪器相比较,其的专一性比较强,不能用作其它用途。就仪器的配置而言专用的阳离子树脂氨基酸分离柱、微量的输液系统、专用的检测器、反应系统均要配备上并且要与国际、国内、涉外标准的检测方法(离子交换柱后茚三酮行生方法)相符合。

特点

1.液相方法生成二级衍生物的问题不存在。

2.峰形显高斯分布,体系能够较快地稳定。

3.操作简单,较短的分析周期,较高的分辨率,灵敏,迅速,能够提供可靠准确的数据。

4.具有比较好的保留时间,峰面积以及重现性,检出限能够达到3pmol。

故障解决

故障现象:只有泵1有较高的压力

产生原因1:除氨柱堵塞

判断方法1:将除氨柱出囗管路脱开以后,压力要比0.3MPa大很多很多。

解决方法1:对清洗反应柱方法进行参考或者对除氨柱重新进行填充。

产生原因2:自动进样器有关管路被堵塞

判断方法2:将通往在线过滤器的管路开路后依然有比较高的压力。

解决方法2:很难判断该故障,通常的规律,这种故障大多在六通阀及取样环部位发生。

产生原因3:压力传感器出囗过滤网被堵塞

判断方法3:脱开除氨柱入口的管路后依然有比较高的压力

解决方法3:将过滤网取岀后用超声波清洗

产生原因4:在线过滤器被堵塞

判断方法4:脱离在线过滤器与分析柱以后,压力要比0.5MPa高很多很多。

解决方法4:取岀过滤器的滤芯,通过超声波凊洗半个小时以后,在压力恢复正常之前反相开路用缓神

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与氨基酸分析仪特点相关文章
氨基酸分析仪故障解决
氨基酸分析仪的注意事项和故障解决

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器,称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸,然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。下面就让小编带你了解一下氨基酸分析仪的注意事项和故障解决。

仪器使用注意事项

(1)进样浓度范围:0.4—10nmol,如果浓度过高,会对分析结果产生影响,并且容易将反应柱堵塞。

(2)对仪器泵的压力正常与否进行检查。

(3)如果有长期不使用的计划,能够使用B5对泵的流路进行清洗。然而Z好仅对泵头进行清洗,也就是开泵的时候,Z好打开排放阀。

(4)氮气压力:0.05—0.1Mpa为仪器需要的压力,如果压力太高,会对仪器造成损坏。

(5)为了防止堵塞,需要对泵1泵2的打开顺序留心,首先将泵1打开,之后再将泵2打开。泵1用B61**%,0.1ml/分钟;泵2用R31**%,0.1ml/分钟。

(6)禁止对电脑的设置进行更改,禁止对其他程序进行安装,禁止上网,防止病毒染上。

故障解决

故障现象:降低灵敏度

产生原因1:进样量不足。

判断方法1:全部组分峰值值都低。

解决方法1:为了避免有气泡在内部产生,进样器用缓冲液充分清洗。

产生原因2:茚三酮失效。

判断方法2:将茚三酮与茚三酮缓冲液的配比改变以后,对峰值有无变化进行观察。

解决方法2:将反应液重新配置。

产生原因3:反应柱柱温下降。

判断方法3:对屏幕温度指示值进行观察。

解决方法3:和维修部门进行联系。

故障现象:分辨率下降

产生原因1:分析柱柱效下降。

判断方法1:对出峰情况进行观察。

解决方法1:对柱子进行重新填充。

产生原因2:缓冲液成分配置不准确。

判断方法2:对PH值进行检查。

解决方法2:对缓冲液重新进行配置。

产生原因3:分析程序设置不正确。

判断方法3:将程序改变之后再进行观察。

解决方法3:对程序进行重新设置。

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氨基酸分析仪应用
氨基酸分析仪的特点和应用

用来进行蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的测定的仪器,称为氨基酸分析仪。必须先蛋白质及肽水解成单个氨基酸,然后再进行氨基酸分析。其是以阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定为基准的离子交换色谱仪。下面就让小编带你了解一下氨基酸分析仪的特点和应用。

特点

1、高灵敏度:

按照蛋白水解液标准作为例子,能够检测到3pmoL。

2、快速、高分辨率:

水解氨基酸仅需半个小时的分析时间,生理体液仅需110分钟。

3.柱后衍生技术:

和氨基酸反应之前才混合两种反应液,使反应液的使用期限得到了有效的延长,并且不需要额外的制冷装置存放。

4、氨气排除系统:

除氨柱増加了,能够将氨在分析过程中对基线及峰形的干扰很好地进行排除。

应用

(一)农业、食品、饮料及其它

检验测定茶氨酸来鉴别真伪茶叶

对酱油级别的认定

对玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测

 对果汁、饮料进行真伪的鉴别

(二)饲料上的应用

真伪鉴别

赖氨酸、蛋氨酸含量高是鱼粉氨基酸组成特点,真伪通过对氨基酸的分析很容易就可以辨别

质量控制

各种饲料必需氨基酸的含量和它们之间的比例必须恰当,为了使质量得到保证,需要对原料和产品中的氨基酸含量进行测定。

(三)医学上的应用

必需氨基酸在创伤愈合中的关系

肿瘤组织氨基酸代谢的变化规律

氨基酸代谢异常角度阐述了氨基酸与肝性脑病的关系

血清中11种游离氨基酸的降低可直接影响人体组织的正常发育、生长

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