荧光分光光度计的使用

荧光分光光度计的操作使用比较复杂，用户在买来荧光分光光度计后往往对如何使用往往比较犯难。我们就此来为大家分享该设备的使用方法。

使用说明（操作前必读）

1、硬件操作

荧光分光光度计在使用时，需要注意开机次序，以保护设备之间不受影响。荧光光谱仪开机顺序一般为先开氙灯，然后开仪器主机，Z后开跟仪器连接的计算机。如此操作的原因在于稳态氙灯是高压点亮，为了避免瞬问脉冲电流对周围设备造成影响，需要先开氙灯，等电流稳定后再打开周边的电脑等设备。关机顺序则相反。

2、软件操作

荧光定量分析多采用工作曲线法，即以已知量的标准物质，按试样相同方法处理后，配成一系列标准溶液，测定其相对荧光强度和空白溶液的相对荧光强度；扣除空白值后，以荧光强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制工作曲线；然后将处理后的试样配成一定浓度的溶液，在同一条件下测定其相对荧光强度，扣除空白值后，从工作曲线上求出荧光物质的含量。

在用荧光分析法测定某些会引起荧光改变的微量物质时，常采用差示荧光法，可使荧光强度的读数差距拉大，使荧光强度的降低加大，从而提高方法的灵敏度和准确度。

荧光分光光度计操作步骤

1、开机

（1）开启计算机

（2）开启仪器主机电源按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色为正常。

（3）双击桌面图标（FL SoluTIons 4.1 for F-7000），主机自行初始化，扫描界面自动进入

（4）初始化结束后，须预热15-20分钟，出现操作主界面（界面右下角出现Ready）

2、点击扫描界面右侧“Method”

在“General”选项中的“Measurement”选择“wavelength scan”测量模式 在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数 选择扫描模式“Scan Mode”：Emission/ExcitaTIon（发射光谱/激发光谱） 选择数据模式“Data Mode”：Fluorescence （荧光测量） 设定波长扫描范围

扫描荧光激发光谱（ExcitaTIon）：需设定激发光的起始/终止波长（EX Start/End WL）和荧光发射波长（EM WL）

扫描荧光发射光谱（Emission）：需设定发射光的起始/终止波长（EM Start/End WL）和荧光激发波长（EX WL）

其他选项可选择默认值（也可根据具体实验要求自行设定） 参数设置好后，点击“确定”

3、设置文件存储路径（此步也可不进行参数设置，可以在按5中方法进行保存）

（1）点击扫描界面右侧“Sample”

（2）样品名可自行命名

（3）选中“Auto File”，可以自动保存原始文件和TXT格式文本文档数据

（4）参数设置好后，点击“OK”

4、扫描测试

（1）打开盖子，放入待测样品后，盖上盖子（请勿用力）

（2）点击扫描界面右侧“Measure”，窗口在线出现扫描谱图

5、数据处理与保存

（1）选中自动弹出的数据窗口

（2）右键--“Trace”，进行读数并寻峰等操作

（3）“File”--“Save as”对数据进行保存

6、关机顺序：

（1）关闭运行软件FL SoluTIon 2.1 for F-7000

（2）选中“Close the lamp，then close the monitor windows？”点击“Yes”窗口自动关闭同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP指示灯暗下来，而RUN指示灯仍显示绿色

（3）约十分钟后，关闭仪器主机电源，即按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）（目的是仅让风扇工作，使Xe灯室散热）

（4）从样品池中取出所有比色皿，清洗干净以便下一次使用

（5）关闭计算机

荧光分光光度计使用注意事项

1、在实验开始前，应提前打开仪器预热，并配制好所需的溶液，对于已经配制好的溶液，在不用时放在4℃冰箱中保存，放置时间超过一星期的溶液要重新配制。

2、在测试样品时，注意荧光强度范围的设定不要太高，以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。

3、实验所用的样品池是四面透光的石英池，拿取的时候用手指掐住池体的上角部，不能接触到四个面，清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。

4、实验结束后，要及时的清理台面，处理废液，清洗和放置好样品池，将下次要用的溶液放回冰箱，并且按规定登记实验记录，养成良好的实验习惯。