暗视野显微镜的使用方法|注意事项

　　暗视野显微镜的采用的暗场聚光镜。不让光束由下至上的通过被检物体，而是将光线改变途径，使其斜射投向被检物体，使照明光线不直接进入物镜，利用被检物体表面反射或衍射光而形成的明亮的图象。因此，在暗视野显微镜镜检时。只能观察到物体的存在，运动及外部形态，而很难分辨其内部结构。

暗视野显微镜的使用方法

　　暗视野显微镜镜检，可使用研究用暗视野显微镜，或将普通光学显微镜上的聚光器取下，换上暗场聚光器。

　　暗视野显微镜的操作方法：

　　1、不论是使用干燥物镜还是油浸物镜，暗视野显微镜镜检时，都应在聚光器的上透镜上加一大滴香柏油。

　　2、将制作好的细菌悬滴标本片置于载物台上，上升聚光器至顶部使油与载玻片接触。

　　3、放大光源。

　　4、进行聚光器光轴调节及调焦。用10×物镜找到被检物像，关小聚光器虹彩光圈至可在视野中看到视场光阑的轮廓，再上下缓慢调整聚光器，这样会使视场光阑的像变得清晰，如视场光阑不在场ZY，利用聚光器外侧的两个调节钮进行调整，当亮光点调到场ZY后，再将其开大，即可进行观察。

　　暗视场聚光器的使用：

　　1、暗视场聚光器安装：从聚光器座架上卸下明视场聚光器，然后将暗视场聚光器安装到位并固紧。

　　2、将被检样品的玻片标本置于载物台上，需用油浸的暗视场聚光器，要在聚光器上透镜与载玻片之间滴加香柏油，使之密接。

　　3、聚光器合轴调中：用低倍物镜对样品聚焦，随之用聚光器升降螺旋上下调节聚光器位置，当在暗视场中清晰地窥见一光环或圆形光点时，停止升降聚光器，用聚光器调中螺杆移动聚光器，使光环或光点调至视场ZX位置。

　　4、调节聚光器焦点：转动聚光器升降螺旋，使视场中的光环调成一Z小的圆形光点。此刻聚光器的焦点恰好位于样品处。

　　5、更换需用的高倍物镜进行暗视野显微镜镜检观察。

　　暗视场光挡的制作方法：

　　1、转动聚光器升降螺旋，使聚光器达到Zgao位置。

　　2、用低倍物镜对样品聚焦。

　　3、暗视野显微镜聚光器合轴调中。

　　4、将欲使用的物镜旋入光路，然后对样品聚焦。

　　5、取出一个目镜。

　　6、通过暗视野显微镜目镜筒向下观察，在物镜透镜中的后焦面处，可见聚光器孔径光阑的影像。往复旋转孔径光阑调节环或拨动调节杆，使孔径光阑开孔的内缘与物镜孔径的内缘完全重合时为止。

　　7、根据所测得的直径，用黑纸制作暗视场光挡，粘贴于滤色镜ZY部位并放于滤色镜支架上(黑纸朝下)，检查暗视野效果并进行调整，使光挡的ZX准确地位于显微镜光轴的轴心部位。

　　9、暗视野观察。

暗视场显微镜使用注意事项

　　1、制作暗视场光挡时，若光挡直径过小或光挡的ZX位置不正，则不能全部挡掉直射光，视野不暗，样品与背景的明暗反差不明显;若光挡直径过大，聚焦到样品上的光线不足，使暗视野显微镜观察到的样品亮度不佳，影响观察效果。

　　2、使用暗视野显微镜时，照明光源的照明强度要高，否则样品的反射光强度不够，影响观察效果。

　　3、若视场中样品与背景明暗反差不强时，可以上下调节聚光器的位置，使视场内的反差提高。

　　4、要求使用的载玻片和盖玻片必须无划痕且无灰尘，物镜前透镜也必须清洁无尘。载玻片与盖玻片的厚度应符合标准。载玻片太厚，聚光器的焦点将落在载玻片内，达不到被检物体的平面上;使用油镜头时，由于物镜的工作距离很短，甚至无法调焦，从而看不到或看不清被检物体。

　　5、载玻片的厚度要适宜，照明光束经暗视野显微镜聚光器后，产生空心照明光锥，即ZX为暗区。而反射光的焦点在聚光器上透镜表面之上，很短的距离。因此，载玻片的适宜厚度为0.8～1.2mm。

　　6、物镜的数值孔径必须小于聚光器的数值孔径，否则会因物镜的孔径角大于暗视野显微镜聚光器所形成的照明光束ZX暗区的角度，致使部分照明光线射入物镜，破坏或降低了暗视场的照明。

　　7、暗视野显微镜镜检时室内要暗，如果没有这样的条件，应尽可能使用遮光装置，以阻止目镜周围的光线射入。

　　8、在进行油镜镜检时，由于油内的杂质和气泡的漫反射，会妨碍暗视野显微镜镜检效果，所以要求尽可能地除掉油内的杂质和气泡。